【摘 要】
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目的结直肠癌是常见的消化系统恶性肿瘤,其发生发展涉及多个基因共同作用,目前临床上尚缺乏高效特异的生物标志物。本研究基于蛋白组学技术已筛选出差异蛋白HtrA3,通过生物信息学分析结合蛋白表达验证和细胞功能实验研究,探讨HtrA3表达对结直肠癌细胞表型的影响,以期为结直肠癌提供早期诊断或预后治疗的潜在蛋白标志物。方法1.（1）严格按照纳入标准分别选取25对和24对结直肠癌组织和相应的癌旁正常组织,采用
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目的结直肠癌是常见的消化系统恶性肿瘤,其发生发展涉及多个基因共同作用,目前临床上尚缺乏高效特异的生物标志物。本研究基于蛋白组学技术已筛选出差异蛋白HtrA3,通过生物信息学分析结合蛋白表达验证和细胞功能实验研究,探讨HtrA3表达对结直肠癌细胞表型的影响,以期为结直肠癌提供早期诊断或预后治疗的潜在蛋白标志物。方法1.（1）严格按照纳入标准分别选取25对和24对结直肠癌组织和相应的癌旁正常组织,采用qPCR和western blot实验分别检测HtrA3转录和蛋白表达水平;（2）严格按照纳入标准选取75对结直肠癌组织和相应的正常组织,应用免疫组织化学实验验证HtrA3表达,并探讨HtrA3表达水平对患者生存的影响。同时,利用患者EORTC QLQ-C30量表与QLQ-CR38随访调查量表,采用恶化时间模型对患者的术后生命质量进行分析。2.利用生物信息学分析,选取TCGA、GEO和CPTAC等公开数据库对HtrA3致癌作用进行泛癌分析,从基因表达、生存预后、遗传改变、免疫浸润以及相关机制通路等方面探讨HtrA3与常见消化系统肿瘤的关联。3.（1）利用western blot实验探讨HtrA3在5种肠癌细胞株中的表达水平;（2）通过慢病毒感染肠癌细胞,构建HtrA3稳定过表达的HCT116细胞株和HtrA3瞬时沉默的SW480细胞株,并利用western blot实验验证HtrA3的表达情况;（3）采用CCK-8法、划痕实验、Transwell细胞迁移实验和Transwell细胞侵袭实验检测HtrA3过表达及沉默后,对肠癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。结果（1）qPCR和western blot实验提示HtrA3在结直肠癌癌组织中的转录和蛋白水平均表达上调;（2）免疫组织化学实验进一步验证HtrA3在结直肠癌组织中表达上调,但未发现HtrA3与患者生存预后相关。2.（1）对于常见的消化系统肿瘤,仅在结肠腺癌中,HtrA3的表达量高于相应的癌旁正常组织,且HtrA3高表达与患者总生存期缩短相关;（2）HtrA3遗传改变与患者生存无关,HtrA3表达与肿瘤相关成纤维细胞的浸润值呈正相关。另外,HtrA3在肿瘤发病中的作用可能与“PI3K-Akt信号通路”、“黏着斑”、“蛋白消化和吸收”以及“ECM-受体相互作用”有关。3.（1）构建HtrA3稳定过表达的HCT116细胞株和HtrA3瞬时沉默的SW480细胞株,并经western blot实验验证HtrA3表达水平;（2）HtrA3过表达能够促进肠癌细胞HCT116的增殖、垂直迁移以及侵袭能力,而当HtrA3被敲低,肠癌细胞SW480的增殖、垂直迁移和侵袭能力受到抑制。结论HtrA3在结直肠癌癌组织中表达上调,HtrA3表达可促进肠癌细胞的增殖、垂直迁移以及侵袭能力,HtrA3高表达可能促进结直肠癌的发生发展。
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