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目的：建立一种可以在微孔板上快速检测金黄色葡萄球菌的纳米金标记-逐步银染法,并将该方法应用于多种临床标本的快速检测。方法：采用HEPES还原法制备纳米金,并使其与巯基修饰的寡核苷酸探针偶联从而制备纳米金探针。以金黄色葡萄球菌特异的nuc基因为靶序列,利用己包被链霉亲和素的微孔板,将PCR扩增的nuc基因与生物素探针、纳米金探针形成的三明治杂交结构锚定其上,加入银染液于低温下逐步银染显色,通过酶标仪检测放大的银染信号。评价该方法的灵敏度、特异性及重复性。对51例临床标本进行检测,并将检测结果与PCR法、培养生化鉴定法进行比较。结果：制备出平均粒径为12nm,且高度分散的纳米金溶液。标记了巯基探针的纳米金的最大吸收峰发生了5nm红移。通过一系列优化实验建立微孔板上纳米金标记-逐步银染检测体系：逐步银染的条件为4℃银染,5min×4次；杂交体系中生物素探针的最适浓度为100nmol/L；纳米金探针最适浓度为20nmol/L.该方法可以在显著降低非特异性背景信号的同时放大银染信号,检测金黄色葡萄球菌nuc基因的灵敏度为1pmol/L,比常温一步银染法的灵敏度提高约102倍。与所试验的其他菌株均无非特异性扩增与杂交。600pmol/L和6nmol/L靶序列的批内、批间变异系数均小于10%。51例临床标本的检测结果与PCR法一致,与培养生化鉴定法的检测结果之间无显著性差异(P>0.05)。结论：本研究成功构建了金黄色葡萄球菌的纳米金标记-逐步银染法。该方法具有简便快速、灵敏度高、特异性强等优点,不需要特殊仪器仅在酶标仪上即可完成结果的检测,在病原微生物的快速检测领域表现出广阔的发展潜力。