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三联噻吩(α-T)是一类在紫外光照下能产生大量活性氧(ROS)从而有效控制害虫的光敏剂。目前α-T及部分衍生物已商品化用于农业用途。但是其对害虫线粒体的影响一直都少有涉及。为了研究α-T对于害虫这一部分的影响,本实验选取了表皮能透光的埃及伊蚊四龄幼虫作为供试材料进行作用机理研究。通过前期研究α-T的毒力,基于计算出的LC25,LC50,LC75的浓度设置了低,中,高三组浓度,以ROS为核心,通过荧光观察,酶活检测,超微结构分析,qRT-PCR等手段,从可能涉及的氧化应激,线粒体功能障碍,细胞的凋亡、自噬和坏死以及围食膜四个方面开展了研究,着重观察了紫外光照下处理24h后α-T对埃及伊蚊四龄幼虫的影响。具体结果如下:1.处理24h后,α-T对于蚊幼虫,其光照组下的LC25,LC50,LC75分别为0.18,0.27,0.40 mg/L,而黑暗组下的 LC25,LC50,LC75 分别为 20.20,27.75,38.12mg/L,活性分别提升了 112.2,102.7,95.3倍,平均活性提升了近100倍,效果极显著。2.基于α-T的自发黄绿色荧光,观察到0.27 mg/L处理24h后,α-T主要分布于四龄幼虫的胃盲囊、中肠和马氏管部位。通过进一步的DCFH-DA探针观察到,α-T能诱导浓度依赖型的ROS在幼虫体内产生(P<0.05),且主要产生在中肠部位。3.进一步检测了中肠部位的氧化应激情况,低浓度α-T能诱导SOD、CAT、GSH-PX(P<0.05)等活力的上升,并显著提高还原型GSH的含量(P<0.05);而中高浓度组α-T却又显著抑制SOD、CAT的活力(P<0.05),GSH、GR的活力的显著升高表明谷胱甘肽系统不受影响(P<0.05),但GSH和GSSG的比率的逐级下降表明中高浓度处理下细胞处于高氧化的状态。与对照相比,MDA,蛋白质羰基和8-OHdG含量的显著增加也表明在中高浓度时氧化损伤加剧(P<0.05)。4.探讨了 α-T与ROS主要产生场所线粒体的关系。透射电镜结果表明,中高浓度组α-T能致使线粒体空泡化,且浓度越高,空泡程度越大。线粒体TCA循环和ETC酶活及ATP含量结果表明,低浓度组的α-T能诱导除CS之外其它酶的活力不同程度的升高(P<0.05)。但在高浓度下,这些指标相比于对照全部所下降,其中作为ROS主要产生位点的复合物Ⅰ和Ⅲ,0.4 mg/L处理组的活性比0.18 mg/L处理组分别低了 74.8%和60.5%(P<0.05)。而mPTP和MMP的检测结果都随α-T的浓度升高而逐渐增大(P<0.05),表明线粒体膜收到损伤。综合结果表明,中高浓度α-T能诱导的造成线粒体空泡化,并抑制线粒体内部代谢,损伤膜结构,致使线粒体功能障碍。5.研究了 α-T与细胞死亡模式的关系。DNALadder观察结果表明,仅在低浓度下,α-T能诱导细胞凋亡,同时凋亡相关基因Dronc、Michelob_x、caspase 7、caspase 8、p53的相对表达此时均有上调(P<0.05);中浓度下Dronc、Caspase 7、p53基因相比与对照组仍有着较高表达(P<0.05),同时自噬基因ATG1、ATG4A、ATG8的相对表达达到最高(P<0.05),结合坏死细胞及细胞溶质Ca2+浓度的升高,表明此浓度下自噬相关基因和部分凋亡基因自噬化表达,诱导自噬并促进细胞坏死;高浓度α-T处理组中,相比于对照,凋亡和自噬基因的表达均受到抑制(P<0.05),同时坏死细胞和细胞溶质Ca2+浓度进一步升高(P<0.05),表明α-T高浓度下直接通过ROS介导细胞坏死。6.研究了 α-T对围食膜的影响。FTTC-dextran摄取结果观察到,对照组4k、40k、150k摩尔质量的FTTC-dextran均会渗出围食膜,仅2M的FTTC-dextran不会渗透围食膜。所有摩尔质量FTTC-dextran均不能渗出上皮细胞。4k摩尔质量的FTTC-dextran肠吸收实验表明围食膜通透性呈浓度依赖性改变。同时中高浓度组几丁质的含量相比于对照也有显著下降(P<0.05)。综合结果表明α-T能损伤围食膜结构,造成肠道屏障障碍。