【摘 要】
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目的:运用STRING及GEPIA数据库对TLR4与KDM2B之间相互作用关系进行预测;检测Toll样受体4（TLR4）与组蛋白去甲基化酶KDM2B在正常卵巢组织、良性卵巢肿瘤及卵巢恶性肿瘤中的表达情况,分析两者与卵巢癌临床病理特征的关系及临床意义,明确两者之间表达的相关性;研究TLR4通路激活后对卵巢癌细胞SKOV3及A2780细胞系中KDM2B表达情况的影响,以及对卵巢癌细胞生物学行为的影响。
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目的:运用STRING及GEPIA数据库对TLR4与KDM2B之间相互作用关系进行预测;检测Toll样受体4（TLR4）与组蛋白去甲基化酶KDM2B在正常卵巢组织、良性卵巢肿瘤及卵巢恶性肿瘤中的表达情况,分析两者与卵巢癌临床病理特征的关系及临床意义,明确两者之间表达的相关性;研究TLR4通路激活后对卵巢癌细胞SKOV3及A2780细胞系中KDM2B表达情况的影响,以及对卵巢癌细胞生物学行为的影响。方法:1.运用STRING对TLR4与KDM2B行蛋白质-蛋白质相互作用网络（PPI）分析,在GEPIA中分析TLR4与KDM2B的在卵巢癌中的相关性。2.采用免疫组化法分别检测正常卵巢、良性卵巢肿瘤及卵巢癌组织中TLR4与KDM2B蛋白的表达情况,并分析卵巢癌组织中TLR4与KDM2B蛋白表达与卵巢癌临床病理学特征的相关性。3.采用细胞免疫荧光法检测TLR4在人卵巢癌细胞株SKOV3和A2780中的表达情况。采用CCK-8试剂盒检测不同浓度TLR4配体脂多糖（LPS）刺激卵巢癌细胞株SKOV3及A2780细胞24小时的细胞增殖情况,明确增强卵巢癌A2780及SKOV3细胞增殖能力的最适LPS浓度;使用LPS激活TLR4信号通路、拮抗TLR4受体预处理后LPS激活TLR4信号通路,分别采用实时荧光定量PCR法及Western blot法检测的卵巢癌细胞株SKOV3及A2780细胞中TLR4及KDM2B的m RNA和蛋白表达情况,采用CCK-8试剂盒检测卵巢癌细胞的增殖情况,并采用Transwell小室实验检测卵巢癌细胞的迁移情况。结果:1.STRING行蛋白质-蛋白质相互作用网络（PPI）分析结果显示TLR4与KDM2B可能存在相互作用关系;GEPIA中分析结果显示TLR4与KDM2B的在卵巢癌中呈正相关。2.TLR4蛋白在上皮性卵巢癌组织中的阳性表达明显高于良性卵巢肿瘤和正常卵巢组织（P<0.05）;KDM2B蛋白在上皮性卵巢癌组织中的阳性表达明显高于良性卵巢肿瘤和正常卵巢组织（P<0.05）;TLR4与KDM2B蛋白在卵巢癌中的表达与肿瘤组织分级、FIGO分期及淋巴结转移有关,两者在卵巢癌组织中的表达呈正相关（P<0.05）。3.细胞免疫荧光法检测证实TLR4在人卵巢癌细胞系SKOV3和A2780中高表达。CCK-8法检测结果显示:（1、5、10、20、40ug/ml）LPS刺激卵巢癌A2780细胞后细胞增殖能力均增强（P均<0.05）,其中LPS浓度为20ug/ml时A2780细胞增殖能力最强（P<0.05）;在SKOV3细胞株中,浓度为10ug/ml与20ug/ml LPS的刺激卵巢癌SKOV3细胞时细胞增殖能力增强（P均0.05）。LPS激活TLR4信号通路时,TLR4和KDM2B的m RNA及蛋白表达量增加（P均<0.05）,TAK-242拮抗TLR4受体预处理后再使用LPS激活TLR4信号通路,TLR4及KDM2B的m RNA及蛋白表达量较单独使用LPS激活TLR4信号通路时减少（P均<0.05）。LPS激活TLR4信号通路时,卵巢癌细胞的增殖和迁移能力增强（P均<0.05）,TAK-242拮抗TLR4受体预处理后再使用LPS激活TLR4信号通路,卵巢癌细胞的增殖和迁移能力较单独使用LPS激活TLR4信号通路时减弱（P均<0.05）结论:1.TLR4与KDM2B蛋白在上皮性卵巢癌组织中高表达,均与肿瘤组织分级、FIGO分期及淋巴结转移有关,两者在卵巢癌组织中的表达呈正相关。2.在卵巢癌A2780/SKOV3细胞中,激活TLR4信号通路上调KDM2B的表达并促进卵巢癌细胞的增殖与迁移。3.在卵巢癌A2780/SKOV3细胞中,激活TLR4信号通路后TLR4表达量增加。
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