目的:探究诱骗受体3(Decoy receptor 3,Dc R3)对于类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)患者破骨细胞及成纤维样滑膜细胞(Fibroblast-like synoviocytes,FLS)的作用及机制。方法:第一部分:Dc R3对于破骨细胞的作用及机制1、应用不同浓度Dc R3诱导小鼠RAW 264.7细胞系向破骨细胞分化,在经抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色鉴定后,计数TRAP阳性、细胞核≥3个的破骨细胞数量,来探究Dc R3对于破骨细胞生成的作用。2、Dc R3联合或不联合RANKL/M-CSF诱导破骨细胞分化,经TRAP染色鉴定后,计数破骨细胞数量,进一步探究Dc R3对于RANKL/M-CSF诱导破骨细胞生成的作用。3、通过Western Blot探究Dc R3在破骨细胞分化中所涉及的分子通路。第二部分:Dc R3对于成纤维样滑膜细胞的作用1、分别通过q RT-PCR及ELISA测定RA患者成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)及骨关节炎患者成纤维样滑膜细胞(OA-FLS)的Dc R3表达及分泌情况。2、应用不同浓度Dc R3分别处理RA-FLS、OA-FLS,通过q RT-PCR检测细胞内炎症因子IL-6、IL-8及MMP-3表达水平的变化;同时通过ELISA检测TNF-α释放情况。结果:第一部分:Dc R3对于破骨细胞的作用及机制1、Dc R3促进破骨细胞分化:Dc R3浓度依赖地促进小鼠RAW 264.7细胞系向破骨细胞分化,增加所形成的破骨细胞数量。2、Dc R3增强M-CSF诱导的破骨细胞分化:Dc R3不能显著增加RANKL诱导生成的破骨细胞数量;对于M-CSF来说,Dc R3显著增加M-CSF诱导生成的破骨细胞数量。3、Dc R3通过促进ERK磷酸化促进破骨细胞分化:Dc R3通过促进细胞核内ERK的磷酸化,来诱导破骨细胞分化,同时Dc R3能够通过促进ERK磷酸化来增强M-CSF诱导的破骨细胞分化。第二部分:Dc R3对于成纤维样滑膜细胞的作用1、对比OA患者,RA-FLS表达Dc R3 m RNA水平升高,同时分泌Dc R3蛋白量增加。2、Dc R3能够促进RA及OA患者成纤维样滑膜细胞内炎症介质IL-6、IL-8m RNA的表达并促进成纤维样滑膜细胞释放TNF-α。结论:Dc R3不仅可以通过促进ERK磷酸化来独立诱导破骨细胞分化,增加生成的破骨细胞数量,并增强M-CSF诱导破骨细胞生成的作用。RA患者体内成纤维样滑膜细胞高表达并分泌Dc R3,同时Dc R3能够促进成纤维样滑膜细胞内IL-6、IL-8的表达,增加TNF-α的释放。以上研究表明Dc R3能够通过促进破骨细胞生成以及诱导滑膜炎症共同参与RA的发生发展。