青虾,学名为日本沼虾(Macrobrachium nipponense),是我国重要的淡水养殖虾类。青虾雌雄个体之间的生物学或经济性状存在显著差异,如雄虾生长速度快于雌虾,性成熟雄虾个体明显大于同龄雌虾。因此,青虾的性别控制研究具有重要的学术价值和生产意义。本文拟采用DNA分子标记技术分析雌雄青虾遗传差异,以筛选性别相关的标记。本文包括以下三个方面：1.青虾雌雄差异的序列相关扩增多态性分析(SRAP)分析采用100对引物对太湖野生青虾雌性混合模板(♀)和雄性混合模板((?))分别进行SRAP分析。期中27对引物组合扩增出30条群体水平性别特异带,22条为雄性群体特异条带,占73.3%；8条为雌性群体特异条带,占26.7%。扩增出群体差异的27对SRAP组合对雌雄个体分别进行SRAP扩增,其中引物m5e2扩增出一条带,大小为265bp,命名为m5e2-265,30尾雌性个体中有13尾扩增出此带,占43.3%；30尾雄性个体中有5尾扩增出此带,占16.6%。比例为2.6：1(43.3%：16.6%),显著偏离1：1,推测该片段对应的DNA位点与性别有一定关联,其所对应的位点可能位于性别决定基因的相邻区域,受性别决定基因的控制。2.青虾雌雄差异的微卫星(SSR)分析利用9个SSR分子标记对太湖野生青虾雌雄个体进行遗传多样性分析。共检测到54个等位基因,每个位点产生的等位基因数3～12个,平均每个位点产生6个等位基因。各等位基因在雌雄群体中的等位基因频率均有差异,其中等位基因Mni009-B,Mni001-A,WXMN13-B,E在雌雄群体中的等位基因频率值差异显著,分别为♀0.0357：(?)0.1833(1：5.13),♀0.2321：(?)0.0741(3.13：1),♀0.2500：(?)0.0833(3：1),♀0.2292：(?)0.0833(2.75：1),都显著偏离1：1；等位基因WXMN03-F、G,WXMN04-B、F、H,WXMN11-D仅在少数雌性个体中出现, WXMN13-A、H,WXMN04-E、J、L仅在少数雄性个体中出现。以上等位基因很有可能是与性别相关的等位基因。3.鲤鱼AFLP-银染体系的建立及对青虾适用性的研究以建鲤为材料,对扩增片断长度多态性(AFLP)反应体系进行优化,建立了适合于鲤鱼的AFLP反应体系：提取建鲤血细胞DNA为模板；50gL酶切反应物总体积,MseI和EcoRI37℃双酶切5h效果最佳；10μL预扩体系,引物为E+A和M+C；25μL选扩体系,预扩增产物稀释40倍至30ng／μL,选扩引物E+3与M+3浓度配比为1：8时产物浓度较高；最后结合经典AgNO3-Na2CO3银染显色。通过优化的AFLP程序,本实验室筛选出8对多态性引物。此外,鲤鱼-AFLP体系对青虾的适用性研究结果表明,该体系也适用于青虾,扩增效果较理想,为AFLP应用到青虾的遗传学研究打下基础。