我国芡实种植范围广、产量高、种质资源丰富,但在芡实加工过程中芡实壳一般都被直接丢弃。实验室前期及其他研究均发现芡实壳提取物中含有酚类物质且具有抗氧化及抑菌活性,但目前对于芡实壳提取物组分解析及其抑肿瘤活性研究相对较少。本文通过有机溶剂分级萃取、硅胶柱层析分离、葡聚糖凝胶纯化并采用活性追踪法对芡实壳醇提物中抗肿瘤活性成分进行分离,通过LC-MS和NMR技术对化合物进行结构鉴定;探究单体化合物对人卵巢癌A2780细胞、人宫颈癌Hela细胞增殖、迁移、侵袭的影响,柯里拉京对A2780细胞周期、凋亡及自噬的影响;通过转录组基因测序及q PCR技术初步阐明柯里拉京体外抗肿瘤分子作用机制。具体实验结果如下:(1)实验首次于芡实壳醇提物中分离、纯化、鉴定得到三种鞣类单宁化合物,分别为鞣花酸(Ellagic acid)、柯里拉京(Corilagin)及老鹳草素(Geraniin)。经HPLC检测三种化合物在芡实壳醇提物中的含量分别31.42mg/g、66.23mg/g、58.41mg/g。(2)三种化合物对Hela细胞增殖均具有显著抑制作用,且具有时间-剂量效应。孵育48h后,柯里拉京对Hela细胞的IC50值为37.54μmol/m L与阳性药5-Fu(5-Fluorouracil)相当;老鹳草素及鞣花酸IC50值为46.61μmol/ml、56.23μmol/ml。柯里拉京及老鹳草素对A2780细胞增殖均具有显著抑制作用,且具有时间-剂量效应。孵育48h后,柯里拉京对A2780细胞的IC50值为47.81μmol/m L略弱于阳性药5-Fu 42.73μmol/m L,老鹳草素为53.12μmol/ml。三种化合物对Hela迁移均具有显著抑制作用,当浓度为40μmol/ml时,柯里拉京和老鹳草素作用相当细胞迁移率分别为(-8.35±1.35)%及(-8.21±1.33)%,鞣花酸为(11.16±1.24)%。柯里拉京和老鹳草素可显著抑制A2780细胞迁移,当浓度为40μmol/ml时,A2780细胞迁移率分别为(-21.15±1.65)%及(-1.48±1.19)%。三种化合物对Hela及A2780细胞侵袭均具有显著抑制作用,当浓度为40μmol/m L,鞣花酸、柯里拉京和老鹳草素对Hela细胞侵袭抑制率分别为:(55.56±1.01)%、(66.67±1.69)%、(63.33±1.02)%,对A2780细胞侵袭抑制率分别为(31.51±1.21)%、(69.86±1.33)%、(61.64±1.48)%。(3)柯里拉京对A2780细胞周期具有显著影响,当浓度为20μmol/m L即可显著降低细胞中G1/G0期、G2/M分裂期比例,将细胞阻滞于S期。柯里拉京能明显引起A2780细胞凋亡,当浓度为20μmol/m L时可显著降低A2780细胞线粒体跨膜电位、增加细胞内钙离子浓度诱导细胞发生凋亡,凋亡率可达13.03%,当浓度为80～100μmol/m L时诱导细胞凋亡作用效果与5-Fu相当,细胞凋亡率最高可达53.37%。柯里拉京孵育可引起A2780细胞中自噬小体的生成,且数量随浓度增高而增加。转录组测序分析发现柯里拉京可使A2780细胞周期及凋亡相关基因发生明显差异表达,凋亡基因主要集中于PI3K-Akt细胞通路。经q PCR验证发现100μmol/m L柯里拉京孵育A2780细胞24h可通过P21基因表达增加,CYCLIND表达降低诱导细胞周期发生变化;BECLIN-1、ATG13、ATG8基因表达提高导致细胞自噬;P53、PUMA、BAX、CASPEASE9、CASPEASE3、CYTOCHROME C基因表达上调而诱导细胞发生凋亡。