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研究目的1.探讨细胞学标本在非小细胞肺癌病例中检测EGFR和K-ras基因突变的可行性,建立细胞学基因突变检测的方法,为EGFR-TKIs个体化治疗提供依据。2.探讨EGFR及K-ras基因突变情况与EGFR、Ki-67蛋白表达和癌细胞数量、异型性、排列形式的相关性。材料与方法1.收集中国医学科学院肿瘤医院病理科细胞学室细胞学诊断有非小细胞肺癌病例的诊断后剩余样本,先由两位细胞学医师评估TCT涂片中癌细胞数量,同时观察记录癌细胞的异型性和排列形式。2.在癌细胞量较多的样本中随机抽出40例同时进行免疫细胞化学EGFR和Ki-67的检测。3.采用PCR技术扩增EGFR基因18-21外显子和K-ras基因12、13号密码子,然后对扩增片段进行测序和分析。结果1.165例细胞学标本提取DNA共有20例不满意标本被舍去,满意率为87.9%(145/165),其中胸水和心包积液有较高的满意率,分别为96.6%和80%,支气管镜刷片的满意率较低(64.7%)。分析标本保存时间和癌细胞量与DNA提取满意情况的关系,发现无统计学差异。2.145例患者中,男性患者EGFR基因突变率为19.4%(14/72),明显低于女性患者(37.0%,27/73)(P=-0.019)。年龄≤60岁的患者的EGFR基因突变率为35.6%(26/73),高于年龄>60岁的患者(20.8%,15/72)(P=0.048)。3. EGFR蛋白的表达与EGFR基因突变之间无相关性,Ki-67蛋白表达的高低与EGFR和K-ras基因突变也均无相关性。4.分别计算不同癌细胞量(5～10%,11～20%,21～30%,31～40%,41～50%,51～60%,61～70%,71～80%和>80%)的EGFR基因突变率。采用Cochran-Armitage趋势检验,结果是Z=4.204,P<0.01,表明癌细胞量与EGFR基因突变率有相关性,癌细胞量增多时,EGFR基因突变率有增高的趋势。当癌细胞量大于30%时,EGFR基因突变率有明显增高的趋势。5.将细胞异型性分为轻度,中度和重度,突变率分别为7.7%,27.6%和40.7%。三者共同、轻度与非轻度、重度与非重度以及轻度与重度的P值均大于0.05,表明细胞异型性与EGFR基因突变无相关性。将细胞排列形式分为乳头排列为主,乳头及散在和散在分布为主,突变率分别为24.6%,29.2%和34.4%。三者共同、乳头排列为主组与非乳头排列为主组、散在分布为主组与非散在分布为主组以及乳头排列为主组与散在分布为主组之间的P值均大于0.05,表明细胞排列形式与EGFR基因突变也无相关性。结论1.采用细胞学标本进行EGFR和K-ras基因突变检测方法可行、结果可靠,对无法获得组织学标本的肺癌患者可以尝试采用细胞学标本进行检测。2.癌细胞量与EGFR基因突变率有相关性,癌细胞量增多时,EGFR基因突变率有增高的趋势。当癌细胞量大于30%时,EGFR基因突变率有明显增高的趋势。3.细胞异型性、细胞排列形式与EGFR基因突变之间均无相关性,因此,TCT涂片中的细胞异型性以及细胞排列形式不能作为对EGFR基因突变预测的指标。目的探讨术中积液或冲洗液细胞学诊断准确性和临床应用价值。方法整理本院521例术中积液和冲洗液细胞学诊断,随诊所有病例的术后病理结果,复阅细胞学假阳性和假阴性涂片,分析术中细胞学涂片特点及诊断准确性,并探讨其临床应用价值。结果521例积液或冲洗液中,恶性细胞检出率为40.32%,病理诊断有腹腔转移的恶性细胞检出率为84.9%。本研究有9例假阳性,18例假阴性。增生活跃的间皮细胞和宫内膜异位上皮细胞与高分化腺癌难以区别,是造成假阳性诊断的主要原因。炎细胞和血细胞多,恶性肿瘤难以检出是造成假阴性的主要原因。结论术中细胞学检查有较高的检出率和诊断准确性,对患者的后续治疗和预后有辅助参考价值。目的探讨卵巢交界性囊腺瘤术中腹水或冲洗液细胞学检出率的影响因素及其细胞学涂片的形态学特征。方法整理我院521例术中积液或冲洗液细胞学诊断,随诊所有病例的术后组织病理结果,分析卵巢交界性囊腺瘤术中腹水或冲洗液细胞学检出率的影响因素。复阅卵巢交界性囊腺瘤的细胞学涂片,观察其细胞学涂片特点,探讨其细胞形态特征及诊断价值。结果521例积液或冲洗液中,共计发现有30例卵巢交界性囊腺瘤,细胞学检出16例,检出率为53.3%。相对卵巢交界性粘液性囊腺瘤,浆液性更易检出(P=0.046)。细胞学检出9例并未种植的卵巢交界性囊腺瘤,细胞学可能发现肉眼或病理未发现的微小种植灶。卵巢交界性囊腺瘤细胞异型性不明显,但有明显上皮结构可提示为肿瘤而非间皮细胞。增生间皮细胞偶可呈乳头结构致使细胞学误诊,但乳头较平铺,无三维立体感。交界性肿瘤细胞与腺癌细胞最有鉴别诊断意义的形态学特征为染色质明显增粗和核型不规则。结论卵巢浆液性交界性囊腺瘤的细胞学检出率相对较高。术中腹水或冲洗液细胞学涂片中,卵巢交界性囊腺瘤细胞／卵巢腺癌细胞和增生活跃的间皮细胞相对容易鉴别,而交界性囊腺瘤细胞与腺癌细胞较难鉴别,染色质明显增粗和核形不规则是最有鉴别诊断意义的形态学特征。