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目的:近年来,越来越多研究发现糖尿病与牙周炎之间可通过炎症反应产生双向影响,且微小RNAs(MicroRNAs,miRs)在其中发挥着重要作用。巨噬细胞作为免疫细胞,在炎症的发生发展、组织改建等方面均发挥着重要作用。目前的研究已显示巨噬细胞参与糖尿病和牙周炎的发病过程。本研究旨在观察高糖环境对THP-1源性巨噬细胞增殖的影响,以及miR-126对高糖环境下的THP-1源性巨噬细胞增殖的调节作用,初步探讨miR-126在糖尿病和牙周炎双向调节之间的作用。方法:1、体外培养THP-1细胞,向培养基中以5ng/ml加入佛波酯贮存液(phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA),孵育48h后,观察细胞的形态变化,确认其已成功转化为巨噬细胞。2、分别用低糖(5.5mmol/l)、中糖(15mmol/l)和高糖(25mmol/l)培养基培养THP-1源性巨噬细胞1、3、5、7d后,采用CCK-8(cell counting kit-8)法检测THP-1源性巨噬细胞的增殖情况,计算细胞增殖活力。3、收集不同糖浓度培养1、3、5、7d后的细胞,实时定量聚合酶链式反应(real time polymerase chain reaction,real-time PCR)检测miR-126及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)、Bcl-2相关性X蛋白质(Bcl 2-associated X protein,BAX)、B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、醇磷脂-3激酶调节亚单位2(phosphoinositol-3 kinase regulatory subunit 2,PIK3R2)、转化生长因子-β3(transforming growth factor-beta 3,TGF-β3)的表达情况。4、按照分组,THP-1源性巨噬细胞分别用低糖、中糖、高糖培养基培养,同时进行miR-126模仿物、miR-126抑制剂或阴性对照转染,并用激光扫描共聚焦显微镜和real-time PCR验证转染效率。5、细胞转染72h后,采用CCK-8法检测THP-1源性巨噬细胞的增殖情况。6、细胞转染72h后,real-time PCR检测细胞内miR-126、caspase-3、Bcl-2、BAX、PIK3R2、TGF-β3等相关基因的表达情况。结果:1、PMA浓度为5ng/ml时,可将THP-1细胞有效诱导转化为巨噬细胞。2、糖浓度升高可抑制THP-1源性巨噬细胞的增殖,细胞存活率下降。3、糖浓度升高可引起THP-1源性巨噬细胞中miR-126、BAX、caspase-3、TGF-β3表达升高(P<0.05),Bcl-2、PIK3R2表达下降(P<0.05)。4、miR-126模仿物转染后,不同糖浓度刺激下THP-1源性巨噬细胞的增殖能力下降(P<0.05);miR-126表达显著上升,并伴随增殖抑制因子BAX、caspase-3、TGF-β3表达升高(P<0.05),增殖促进因子Bcl-2、PIK3R2表达降低(P<0.05)。5、miR-126抑制剂转染后,巨噬细胞增殖能力增强(P<0.05);增殖抑制因子BAX、caspase-3、TGF-β3表达降低(P<0.05),增殖促进因子Bcl-2、PIK3R2表达升高(P<0.05)。结论:1、高糖可抑制THP-1源性巨噬细胞的增殖,促进细胞内miR-126表达。2、miR-126通过上调增殖抑制因子BAX、caspase-3和TGF-β3的表达,下调增殖促进因子Bcl-2、PIK3R2的表达,介导高糖对THP-1源性巨噬细胞增殖的抑制作用,但调控机制仍需深入探索。