清肾颗粒对慢性肾衰竭患者血黏附分子、趋化因子及LPS诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的干预作用

来源 :安徽中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hellobluejay
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目的:研究清肾颗粒对慢性肾衰竭湿热证患者血黏附分子selectin-Eselectin-P、、、1-ICAM1-VCAM水平以及趋化因子IL-8、MCP-1水平的干预作用。方法:使用随机抽样的方式,将68例纳入研究对象之中,然后通过随机抽样的方式进行小组划分,分成对照组与试验组,各34例,对照组:常规治疗方案;试验组:在对照组基础上加用清肾颗粒,疗程12周。观察治疗组与对照组对慢性肾衰竭患者的临床疗效,以及治疗前后血浆P-selectin、E-selectin、VCAM-1、ICAM-1、血清IL-8、MCP-1的水平表达变化情况。结果:1.临床疾病效果比较数据得出:通过12周的治疗后,治疗组患者的整体有效率是82.45%,对照组是55.78%。经过对数据的比较和分析,得出差异具备统计学意义(P<0.05)。2.中医证候疗效对比数据得出:加用清肾颗粒的组别中总有效率是82.53%,对照组总有效率是53.94%,结果差异P<0.05,说明清肾颗粒对改善中医症候有效。3.肾功能(Scr、eGFR):治疗前,两组比较,P>0.05。治疗后,治疗组Scr水平较前降低,而e GFR指标上升(均为P<0.01);组间对比,Scr水平下降,e GFR水平增大,差异显著(P<0.01);对照组治疗前后肾功能差异不显著(P>0.05)。4.HGB、Alb水平对比:治疗前,两组患者血红蛋白(HGB)、血白蛋白(Alb)水平比较,P>0.05。治疗后,组内比较,P<0.01,说明两组HGB、Alb指标明显上升;组间比较,结果显示P<0.01,表示治疗组HGB、Alb水平上升幅度比对照组高。5.黏附分子及趋化因子水平对比:治疗前,两组患者P-selection、E-selection、VCAM-1、ICAM-1、IL-8及MCP-1比较,P>0.05;治疗前后比较,两组患者P-selection、E-selection、VCAM-1、ICAM-1、IL-8及MCP-1水平明显降低(P<0.05);组间对比,治疗组P-selection、E-selection、VCAM-1、ICAM-1、IL-8及MCP-1水平显著小于对照组(P<0.01)。6.安全性观察项目分析:治疗组的患者连续服用12周清肾颗粒,和治疗前相比,三大常规(血、尿、粪常规),有关生化检查(ALT,AST等)和心电图等基本一致。结论:1、清肾颗粒可以有效缓解CRF湿热证患者临床表现,有助于肾功能的好转,对于改善贫血及营养状况表现有一定帮助。2、CRF湿热证患者P-selection、E-selection、VCAM-1、ICAM-1、IL-8及MCP-1水平升高,清肾颗粒能下调升高的P-selection、E-selection、VCAM-1、ICAM-1、IL-8及MCP-1水平。3、本研究期间,无药物不良反应。患者在服用清肾颗粒进行治疗以后,各个指标与之前并未出现显著差异,证实其有着良好安全性。目的:观察清肾颗粒含药血清对脂多糖(LPS)诱导人脐静脉内皮细胞黏附分子(P-selectin、E-selectin、VCAM-1、ICAM-1)、趋化因子(IL-8、MCP-1)及内皮功能障碍标志物(eNOS、ET-1)表达,探讨清肾颗粒对内皮细胞损伤的干预作用。方法:将传代培养的HUVEC随机分为以下5组:正常对照组、LPS组、清肾颗粒低剂量组、清肾颗粒中剂量组及清肾颗粒高剂量组。细胞黏附检测HUVEC的VCAM-1、ICAM-1的细胞黏附率;Western blot法检测HUVEC的E-selectin、VCAM-1、ICAM-1、IL-8、MCP-1、eNOS、ET-1的蛋白含量;RT-PCR法检测HUVEC的P-selectin、E-selectin、VCAM-1、ICAM-1、eNOS、ET-1 mRNA的表达水平;免疫荧光法检测HUVEC的IL-8、MCP-1、eNOS及ET-1的蛋白表达情况。研究清肾颗粒剂量对因子表达的影响。结果:(1)细胞黏附率比较:与正常组比较,LPS诱导的人脐静脉血管内皮细胞VCAM-1、ICAM-1的细胞黏附率显著增大(P<0.05);与LPS组比较,各药物干预组内皮细胞VCAM-1、ICAM-1的细胞黏附率显著下降(P<0.05);各剂量组间进行对比,清肾颗粒高剂量组内皮细胞VCAM-1、ICAM-1的细胞黏附率最低,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)黏附分子、趋化因子及内皮细胞损伤标志物表达情况比较(Western blot法):与正常组比较,LPS诱导的人脐静脉血管内皮细胞E-selectin、VCAM-1、ICAM-1、IL-8、MCP-1、ET-1蛋白表达显著增加,eNOS表达显著下降(P<0.05);与LPS组互相对比,各药物干预组内皮细胞E-selectin、VCAM-1、ICAM-1、IL-8、MCP-1、ET-1蛋白表达显著下降,eNOS表达明显上调(P<0.05);各剂量组间进行对比,高剂量组改善最明显,差异具备统计学意义(P<0.05)。(3)mRNA水平比较(RT-PCR法):与正常组互相对比,LPS诱导的人脐静脉血管内皮细胞P-selectin、E-selectin、VCAM-1、ICAM-1、ET-1 mRNA的表达水平明显升高,eNOS mRNA表达明显降低(P<0.05);与LPS组比较,各药物干预组内皮细胞P-selectin、E-selectin、VCAM-1、ICAM-1、ET-1 mRNA表达明显降低,eNOS mRNA表达明显升高(P<0.05);各剂量组间比较,高剂量组改善状况最为显著,差异具备统计学意义(P<0.05)。(4)免疫荧光染色比较:IL-8、MCP-1、ET-1和eNOS在正常组都有所表达,主要是以红色荧光为主;IL-8、MCP-1和ET-1在LPS组表达显著增强,呈明亮红色荧光;IL-8、MCP-1和ET-1在不同剂量的清肾颗粒干预组表达不同程度减弱,其中以清肾颗粒高剂量组表达最微弱(P<0.05);eNOS在LPS组表达明显减弱;不同剂量的清肾颗粒干预组eNOS会出现不一样的加强,其中主要是以高剂量组最为明显(P<0.05)。结论:(1)LPS诱导HUVEC黏附分子P-selectin、E-selectin、VCAM-1、ICAM-1及趋化因子IL-8、MCP-1的表达增加,降低eNOS释放,增加ET-1分泌。(2)清肾颗粒通过抑制LPS诱导的HUVEC黏附分子P-selectin、E-selectin、VCAM-1、ICAM-1及趋化因子IL-8、MCP-1的表达水平,增加eNOS释放,降低ET-1分泌,进而减轻细胞间的黏附作用及趋化作用,保护血管内皮细胞,且呈剂量依赖性。
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