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[目的]本研究通过上调体内外MicroRNA 133b(miR-133b)的表达,探索miR-133b在日本血吸虫肝纤维化中的作用及机制。[方法]培养肝星状细胞(LX-2),使用不同浓度的TGF-β1,在不同时间点刺激LX-2细胞,采用TGF-β1最佳浓度和时间处理LX-2细胞,利用瞬时转染技术,分别将miR-133b mimics、miR-133b mimics NC、miR-133b inhibitor mimics及miR-133b inhibitor NC质粒转染至LX-2细胞中。qRT-PCR分别检测LX-2细胞中miR-133b、TGF-β1、Smad3、CTGF、Colla I和α-SMA等分子mRNA的转录水平。构建以慢病毒为载体的miR-133b病毒质粒(Lenti-miR-133b)和阴性对照质粒(Lenti-NC)。将6~8周龄雌性KM小鼠随机分成4组,采用尾蚴腹部敷贴法攻击小鼠,未经尾蚴攻击的小鼠为未感染组,其余小鼠为感染组。尾蚴攻击小鼠一周后,经小鼠尾静脉分别注射PBS以及Lenti-NC(1×10~9 TU/mL)和Lenti-miR-133b(1×10~9 TU/mL)的慢病毒质粒,分别在尾蚴攻击后的第4w、6w和8w进行麻醉,摘取肝组织及经眼球取血为后续实验做准备。利用qRT-PCR检测各组小鼠肝组织中miR-133b、纤维化相关分子CTGF、Colla I和α-SMA以及炎症相关因子IL-4和IFN-γ的转录水平;ELISA法鉴定血清中IL-4和IFN-γ的水平;western-blot方法检测CTGF在肝组织中的蛋白表达水平;H&E染色和Masson三色染色评估小鼠肝组织肉芽肿及纤维化变化;试剂盒分析小鼠肝组织中羟脯氨酸含量及血清中ALT含量。[结果]细胞实验结果显示:经TGF-β1处理的LX-2细胞中miR-133b的表达持续下调,且具有时间浓度依赖性。LX-2细胞中转染miR-133b mimics后,miR-133b的表达显著上升。荧光定量PCR显示:转染miR-133b mimics可显著抑制由TGF-β1诱导的CTGF、Colla I和α-SMA的表达(P<0.05),但是对于TGF-β1和Smad3的表达没有影响。动物实验结果显示:在血吸虫尾蚴感染后4w、6w和8w的小鼠肝组织中miR-133b的表达持续减少,经Lenti-miR-133b处理后,miR-133b的表达显著上调(P<0.05)。荧光定量PCR显示:感染组小鼠肝组织中的纤维化相关因子CTGF、Colla I和α-SMA表达均显著高于未感染组(P<0.05);Lenti-miR-133b处理组小鼠肝组织中CTGF、Colla I和α-SMA表达水平明显低于PBS组和慢病毒阴性对照组(P<0.05)。H&E染色和Masson三色染色结果表明:虫卵肉芽肿和纤维化在小鼠感染6w后改变明显,与PBS组和慢病毒阴性对照组比较,miR-133b处理组肝脏病变程度明显减轻。肝组织羟脯氨酸含量分析显示:与未感染组比较,感染组小鼠肝组织羟脯氨酸含量显著升高(P<0.01);小鼠在尾蚴攻击后第6w和第8w,miR-133b处理组小鼠羟脯氨酸含量显著低于PBS组和慢病毒阴性对照组(P<0.05)。血清ALT表达水平分析显示:小鼠感染后4w和第6w,感染组小鼠血清ALT水平显著高于未感染组(P<0.05);与PBS和慢病毒阴性对照组比较,miR-133b处理组小鼠血清中ALT水平降低(P<0.05)。荧光定量PCR和ELISA分析表明:与未感染组比较,感染组小鼠肝组织和血清中IL-4分泌水平在尾蚴攻击后逐渐升高(P<0.05);IFN-γ在尾蚴攻击后第4w显著升高(P<0.05),第6w和第8w下降;但是各感染组中IL-4和IFN-γ的表达没有显著差异。[结论]miR-133b可能通过靶向沉默CTGF的表达抑制HSC的活化以及胶原的沉积减轻小鼠血吸虫病肝纤维化。