原发性干燥综合征(primary Sj?gren’s syndrome,p SS)是一种以进行性炎症和唾液腺、泪腺等外分泌腺损伤为特征的自身免疫性疾病。其发病原因及机制尚不十分明确。目前认为,原发性干燥综合征的发病主要和易感基因、性激素和环境因素有关。研究发现p SS与Th1/Th2细胞免疫平衡被打破以及Th17细胞的参与相关,病变组织中存在T细胞、B细胞、树突状细胞以及自然杀伤细胞的浸润。原发性干燥综合征除了会累及其他器官的病变之外,还会增加B细胞非霍奇金淋巴瘤的发病率。髓源性抑制细胞(myeloid derived suppressor cells,MDSCs)是一群具有免疫抑制能力、未成熟的异质性髓系细胞,包括粒细胞样MDSCs(granulocytic,G-MDSCs)和单核细胞样MDSCs(monocytic MDSC,M-MDSCs)。在健康个体的骨髓中,MDSCs能够迅速分化为成熟的树突状细胞、巨噬细胞和粒细胞。而在病理状况下,MDSCs的分化过程受阻,并大量积聚于体内。近年来,越来越多的研究发现,MDSCs与自身免疫性疾病的发生发展密切相关,然而该细胞在疾病中的具体作用仍存在争议。研究显示,MDSCs在不同的自身免疫性疾病中可能存在不同的作用。即使在同一种自身免疫性疾病中,MDSCs的变化及功能也不尽相同。这可能与疾病的发病机理、疾病的内环境、疾病发病不同阶段的差异以及所研究MDSC亚群不同有关。那么,MDSCs及其亚群在原发性干燥综合征的发生发展中发挥着什么样的作用呢?为此,我们首先建立了小鼠实验性干燥综合征模型(experimental Sj?gren’s syndrome,ESS),且通过ESS分析疾病发生发展过程中MDSCs比例和功能的动态变化。进而,在此基础上研究调控MDSCs功能的分子机制。一、小鼠实验性干燥综合征发展进程中MDSCs比例和功能的变化首先,我们构建了小鼠ESS模型,通过检测发现,ESS小鼠的唾液流速明显低于对照组小鼠,抗唾液腺蛋白抗体、抗M3R抗体和ANA等自身抗体水平显著高于对照组小鼠。另外,ESS小鼠的唾液腺体和颈部淋巴结显著增大,且唾液腺组织病理学检查显示20周的ESS小鼠唾液腺中浸润了大量的淋巴细胞,且有腺管的破坏。由此,确定了ESS模型的成功建立。接着,我们研究ESS发展进程中MDSCs及其亚群比例和数目的变化。通过流式细胞术动态观察了不同时期的ESS小鼠体内MDSCs的变化。研究发现,在小鼠开始出现临床症状,即唾液分泌开始减少时,小鼠的脾脏、淋巴结、外周血中的MDSCs的比例明显升高,且在初次免疫后18天时达到高峰,疾病晚期(10周)达到一个稳定的高水平状态,并且局部唾液腺组织中也开始出现MDSCs的浸润。同时,脾脏中M-MDSCs和G-MDSCs这两个亚群的数目也随着疾病的进程明显升高。我们进一步分析ESS发展进程中MDSCs及其亚群的功能。通过磁珠以及流式细胞术分选ESS早期(18天)和晚期(10周)的小鼠脾脏中的MDSCs及其亚群,检测MDSCs功能相关的主要效应分子(Arg-1、NO)和表面分子(CD40、CD80、CD86、MHCII),以及其对CD4+T细胞增殖的抑制能力。结果显示,早期ESS小鼠脾脏中的MDSCs及其亚群具有较强的抑制能力,而随着疾病的发展,晚期脾脏中MDSCs及其亚群的抑制能力明显减弱。并且发现晚期的MDSCs及其亚群的抑制性效应分子表达下降,,同时CD40、CD80、CD86、MHCII等表面分子表达明显上调,显示其成熟度的上升。由此可见,ESS小鼠体内MDSCs及其亚群免疫抑制能力随着疾病的进展逐渐下降。通过过继转移不同时期的MDSCs于ESS小鼠体内,发现早期的MDSCs能够显著抑制ESS小鼠唾液流速下降,降低自身抗体的水平,以及Th1和Th17细胞的比例,从而有效延缓ESS的发生发展;而晚期的MDSCs不仅没有明显的治疗效果,反而能够上调抗唾液腺蛋白抗体的升高,以及唾液流速的下降程度,增加局部淋巴结中Th1和Th17细胞的比例上升,显示其对ESS具有一定的促进作用。那么,我们接下来的问题就是为什么ESS小鼠体内MDSCs的免疫抑制功能会随着疾病的发展而发生变化呢?因此,我们进行了第二部分的实验研究。二、GITRL对MDSCs功能的调控糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体相关配体(glucocorticoidinduced tumor necrosis factor receptor-related protein ligand,GITRL)是TNF超家族成员之一,研究报道指出GITRL主要参与对效应性T细胞和调节性T细胞功能的调控。近年来,越来越多的证据表明GITRL能够参与多种自身免疫性疾病的发生发展。通过动态观察ESS小鼠体内GITRL的表达,我们发现,随着疾病的进程,ESS小鼠脾脏、淋巴结和唾液腺中GITRL的表达显著升高。此外,我们还首次发现ESS小鼠来源的MDSCs表达GITR,GITRL体外刺激能够下调早期MDSCs的免疫抑制能力。将GITRL处理后的MDSCs过继转移到ESS小鼠中,发现小鼠唾液流速并没有恢复正常,相关的多种自身抗体水平依旧保持在较高水平,效应性Th1和Th17细胞的比例没有出现下降。这说明GITRL蛋白处理后的MDSCs丧失了原有的抑制功能。为了进一步观察GITRL对ESS小鼠体内MDSCs的调控,我们给ESS小鼠注射外源性GITRL蛋白,发现外源性的GITRL能够显著下调ESS小鼠体内MDSCs的免疫抑制功能。进一步地,我们利用小干扰RNA下调MDSCs表面GITR的表达后,将其过继转移至ESS小鼠体内,结果发现在高浓度的GITRL内环境下,干扰GITR后的MDSCs能够有效地抑制ESS小鼠唾液流速的下降;自身抗体水平也显著降低,且Th1和Th17细胞的比例明显下降。这些结果都进一步证明了GITRL通过与MDSCs表面GITR结合,下调MDSCs的免疫抑制能力,从而促进小鼠ESS的发生发展。综上所述:ESS发病过程中体内逐渐升高的GITRL可结合MDSCs表面的GITR受体,下调ESS小鼠体内MDSCs的免疫抑制功能,从而持续加重疾病的发生发展。本研究从GITRL/GITR这一新的角度揭示MDSCs在干燥综合征发展中的变化,拓展了我们对MDSCs在自身免疫性疾病中的认识,为疾病的治疗提供新的思路。