梨（Pyrus spp.）是中国主栽果树之一,栽培历史悠久,分布遍及全国。梨果色、香、味、质俱佳,很受消费者欢迎,在果品市场占有重要地位。砂梨（Pyrus pyrifoliaNakai）品种具有早实性、抗热性较强等特点,近年来南方栽培面积逐渐扩大,产量和品质逐年提高,但现有砂梨品种抗病性不强,特别是抗真菌性病害较弱的缺点在南方高温多湿的气候条件下表现得更为突出、因此,提高砂梨品种抗病能力是当前梨果实生产中亟待解决的问题。随着现代生物技术的发展及植物转基因技术的日趋成熟,使得通过生物工程方法培育具有优良性状的果树新品种成为可能。为此,本研究以我国南方主要栽培品种黄金梨和桂冠梨为试验材料,以期建立砂梨叶片再生体系,并在此基础上以chit42为外源基因进行黄金梨转化试验,构建黄金梨叶片遗传转化体系。主要研究结果如下:1.以黄金梨、桂冠梨离体叶片、茎段为试材,研究了不同的基因型、外植体、接种方式、不同时间的暗培养、NAA和6-BA的浓度配比对离体叶片和茎段再生不定梢的影响,以及不同的培养基,IBA浓度对不定梢的生根的影响。结果表明,黄金梨的叶片较桂冠的叶片再生能力强,而茎段再生能力较弱;叶片接种方式以远轴面向上为宜,茎段接种以横插入培养基为好;15d的暗培养是诱导叶片再生不定芽和梢的必要条件。诱导叶片再生不定梢的最佳培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA2.0mg/L,诱导不定梢生根的最佳培养基为1/2MS+IBA3.5mg/L。2.对黄金梨叶片再生不定梢、不定梢再生不定根不同时期的叶片和根进行扫描电子显微镜观察,结果表明,叶片在试验的10d出现了愈伤组织,在15d左右即出现了类分生组织结构,在40d左右形成了不定梢,在80d时可看到发育完好的不定梢,但是最终形成的梢的数量远少于发生的梢的数量,而发生的梢的数量也远少于所形成的分生组织的数量。不定根的发生数量较多,不定根的数量和形成的类分生组织的数量相差不大。3.通过Cef对黄金梨叶片愈伤组织诱导及不定梢的分化的影响实验以及叶片对Kan抗性预备实验,基本确定遗传转化体系中抗生素最佳使用浓度为Cef 300mg/L、Kan75mg/L。4.以黄金梨叶片为农杆菌介导的转化受体,研究了不同外植体预培养时间、农杆菌的菌液浓度和共培时间对转化的影响,结果表明,当外植体预培养2d,农杆菌菌液OD₆₀₀值为0.6时,共培养时间为3d时转化较好,最后得到抗性芽4个,PCR检测初步表明:其中有两个为阳性。