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杀伤性T淋巴细胞(CTL)是红细胞前期恶性疟原虫免疫防护的关键环节。有效的CTL反应可以阻断疟原虫的生活周期,是目前极受关视的疟疾疫苗设计方案。HLA Ⅰ类分子的多态性限制了旨在刺激产生CTL的免疫治疗工作对人群的保护范围,使抗疟疫苗的研究明显复杂化。CTL多表位重组疫苗的构建是目前解决HLA Ⅰ类分子多态性一个较好的途径。当前恶性疟CTL疫苗研究所面临的另一个问题是缺乏合适的动物模型。开展有关的体外研究,对疫苗潜在的免疫原性进行体外预测,不仅是必然的,而且是可能的。 近年来的研究发现一些HLA Ⅰ类分子结合肽的锚定位点的氨基酸残基具有重叠性,这些锚定残基被称为HLA分子结合肽基序(Motif),具有相同肽基序一类HLA Ⅰ类分子组成一个HLA Ⅰ类分子结合超亚型(Supertype),现有的几乎所有的HLA-A和-B分子都被包括在九个这样的超亚型中。每个结合超亚型对应的共同的肽基序则称为共用肽段(supermotif)。含有相应共用肽段的肽常可与同一结合超亚型的不同HLA Ⅰ发生交连反应。HLA结合亚型和共用肽段的发现,为克服MHC多态性的CTL疫苗设计提供了一个崭新的设想,即通过寻找能与多个HLA Ⅰ类分子结合的表位,代替上述常见多表位疫苗的研究。从而避免了后者繁琐复杂的工作,提高了工作效率,是CTL疫苗研究的新方向。 本实验所选用两个恶性疟抗原CTL表位TR和SH,均来自非洲株系,其中TR来自thrombspondin相关的尚未命名蛋白(TRAP),为HLA-2.1限制;SH来源于子孢子肝细胞结合抗原1(SHEBA),己证实与HLA-B51有高亲和力。上述两个恶性疟CTL表位分别含有HLA-A2和HLA-B7超亚型的共用肽段。 将对应于以上表位的DNA序列设计成微型基因tr和sh。并将其分别克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1/Hygro(+),构建两个重组质粒pcDNA3.1/tr和