论文部分内容阅读
目的: 探讨元通合剂对2型单纯疱疹病毒(HSV-2)的抑制作用,采用Vero细胞培养技术对元通合剂(YT)水提物体外抗HSV-2的药效实验进行研究。 方法: 1.元通合剂的细胞毒性测定 将6个不同浓度(5倍递次稀释)的元通合剂及阳性对照药物ACV分别加入已长成单层的Vero细胞培养板中,每浓度4复孔,同时设不加药物的正常Vero细胞对照组,置于37℃、5%CO2孵箱内培养。逐日倒置显微镜下观察记录元通合剂对Vero细胞的病变效应(CPE),连续观察4d。以不出现细胞变暗、变圆、融合形成空斑、脱落等病变的药物最小稀释倍数为最大无毒浓度(TC0),并按Reed-Muench法分别算出待检药物及阳性对照药物ACV的半数中毒浓度(TC50)。 2.病毒毒力测定 将病毒培养悬液用PBS按10倍递次稀释成10-1~10-7的不同稀释度。向预先培养成层的Vero细胞加入不同浓度的HSV-Ⅱ液。每浓度4复孔,同时设不加病毒的正常Vero细胞对照组,置于37℃、5%CO2孵箱内培养。逐日观察CPE。记录病变程度和孔数,待细胞病变不再继续判定结果。CPE达50%(++)以上则计为病变孔,(++)以下则计为非病变孔。根据Reed-Muench法计算TCID50。 3.抗病毒药效测定 用PBS将病毒稀释成100TCID50备用。分别设不同浓度(选用TC0药液,用维持液倍比稀释8个浓度)的元通合剂组(yuantong group,YTG)、阿昔洛韦组(Acyclovir group,ACVG)、不加药物的病毒对照(virus control group,VCG)和正常细胞对照组(normal cell control group,NCG),各组均设3复孔。以下列加药方式进行实验:Ⅰ.增殖抑制法-细胞以病毒液吸附1.5h后,弃去病毒液加入药物;Ⅱ.感染阻断法-细胞加药物培养24h,弃去含药物的维持液,加入病毒攻击;Ⅲ.直接杀灭法-药物与病毒共同孵育24h后再感染细胞。此后各组细胞继续置37℃、5%CO2孵箱内培养72h。逐日倒置显微镜下观察记录CPE结果。培养72小时后,MTT比色法测定A490值。计算累积细胞存活率(cell surviv rate,CSR%)、药物的病毒抑制率(inhibitory rate,IR%)并按照Reed-Muench法分别计算两种药物对病毒的半数抑制浓度(IC50)和选择指数(SI)。 结果: 1 本实验测得,元通合剂及ACV对Vero细胞的TC0分别为0.16、0.1mg/ml。二者对Vero细胞的TC50分别为6.218、0.468 mg/ml。 2 将病毒原液行连续10倍递次稀释,进行病毒感染性测定,测得HSV-2 333病毒株的TCID50=10-4/0.1ml。 3 三种不同药物加入方式下,实验所设病毒对照组均可见典型CPE,正常细胞对照组均无明显病变。方式IYT和ACV均能不同程度抑制