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第一部分:Hsa-mi R-MTCO3P38是来源于假基因MTCO3P38转录本的新micro RNA目的:发现原发性肝癌(HCC)组织中潜在的新微小RNA(micro RNA)并验证其序列与真实性。方法:小RNA深度测序分析肝癌患者与正常肝患者的手术后肝组织标本,挑选差异表达于肝癌、肝癌旁组织和正常肝组织的新micro RNA(Hsa-mi R-MTCO3P38)。mi Rdeep2 2.0.0.5软件和RNAstructure软件对新micro RNA进行结构分析预测。Northern blotting实验和DNA测序验证新mi RNA的序列与真实性。结果:Hsa-mi R-MTCO3P38(mi R-MTCO3P38)在肝癌组织中的深度测序读取次数显著低于肝癌旁组织(p<0.001,q<0.001)和正常肝组织(p<0.001,q<0.001)。Mi R-MTCO3P38位于假基因MTCO3P38序列上,经预测具有稳定的前体二级结构(mi Rdeep2 score=1.4,p<0.05)。Northern blotting试验结果表明包含mi R-MTCO3P38前体结构DNA序列的质粒可在肝癌细胞中转录并加工产生成熟mi R-MTCO3P38。肝癌组织中的mi R-MTCO3P38 RT-PCR产物经DNA测序验证其序列为5’-UAGGAGGGCUGAGAGGGC-3’。结论:Mi R-MTCO3P38(5’-UAGGAGGGCUGAGAGGGC-3’)的宿主基因是假基因MTCO3P38,并且它是一个稳定表达于人肝癌组织和肝癌细胞中的新mi RNA。第二部分:Mi R-MTCO3P38在肝癌组织的表达与患者临床资料关系及对肝癌细胞的侵袭迁移能力影响目的:观察mi R-MTCO3P38在肝癌组织中的表达情况,分析其表达量与肝癌患者临床预后关系,探讨mi R-MTCO3P38对肝癌细胞的生物学行为影响。方法:RT-PCR技术检测mi R-MTCO3P38在肝癌组织、肝癌旁组织和门静脉癌栓组织(PVTT)的表达差异,同时对比检测人正常肝细胞系L-02和多种肝癌细胞系的表达差异。Kaplan-Meier分析mi R-MTCO3P38表达量与肝癌患者生存时间之间的关系。建立COX回归模型结合单多因素分析探讨影响肝癌患者生存率的独立危险因素。ROC曲线计算mi R-MTCO3P38模拟为HCC疾病诊断标志物的诊断指数。Transwell和细胞划痕修复实验分析mi R-MTCO3P38对肝癌细胞侵袭迁移能力的影响。结果:相对于肝癌旁组织和正常肝细胞系L02,Mi R-MTCO3P38的表达在肝癌组织和肝癌细胞中明显下调。Mi R-MTCO3P38高表达肝癌患者的3年总生存率显著高于低表达患者(p<0.01)。Mi R-MTCO3P38是影响肝癌患者预后的独立保护因素(p<0.05),其表达量与肝癌患者的HBV感染、肿瘤数量、门静脉癌栓(PVTT)和BCLC分期密切相关(p<0.05)。体外实验证明mi R-MTCO3P38可以抑制肝癌细胞的侵袭迁移能力。结论:Mi R-MTCO3P38是一个发挥抑制肝癌转移的分子,其表达下降有提示肝癌患者预后不良的潜力。第三部分:Mi R-MTCO3P38通过结合TMOD1 m RNA 3’UTR下调TMOD1/MMP13通路抑制肝癌细胞侵袭迁移目的:验证mi R-MTCO3P38的靶基因,探究mi R-MTCO3P38降低肝癌细胞侵袭迁移能力的分子机制。方法:转录组学结合靶基因预测软件寻找mi R-MTCO3P38的潜在靶基因(TMOD1);RT-PCR检测过表达mi R-MTCO3P38肝癌细胞的TMOD1表达;荧光素酶报告实验验证mi R-MTCO3P38和TMOD1的作用位点。Western blotting检测过表达mi R-MTCO3P38肝癌细胞的MMP家族蛋白表达;功能回复实验验证mi R-MTCO3P38是否通过TMOD1调节下游通路。结果:TMOD1在过表达mi R-MTCO3P38肝癌细胞的转录组(FDR<0.05)和RT-PCR(p<0.01)检测中明显下调。TMOD1是mi R-MTCO3P38的下游靶基因,TMOD1 m RNA 3’UTR是mi R-MTCO3P38的结合位点。TMOD1过表达能够挽救mi R-MTCO3P38过表达引起的肝癌细胞侵袭迁移力下降和MMP13蛋白下调。结论:Mi R-MTCO3P38通过靶向TMOD1 m RNA 3’UTR下调TMOD1表达,从而降低MMP13蛋白表达,抑制肝癌细胞侵袭迁移的能力。Mi R-MTCO3P38可以作为抗肝癌转移的潜在治疗靶点。