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目的:结合药动学、药效学指标确定真武汤量效关系并评价真武汤的组方合理性,利用均匀设计法进行多组分试验,尝试优化真武汤组方配伍。方法:1.药动学实验（1）建立同时检测大鼠体外及生物样本中包括乌头碱（AC）、苯甲酰乌头原碱（BAC）、新乌头碱（MA）、苯甲酰新乌头原碱（BMA）、次乌头碱（HA）、苯甲酰次乌头原碱（BHA）6种二萜类生物碱的HPLC-MS/MS方法:色谱柱为安捷伦 ZORBAX Eclipse XDB 系列 C18（4.6 mm×150 mm,5 μm）柱,以 70%乙腈-水（含0.1%甲酸、10 mmol几乙酸铵）为流动相,流速为0.5mL/min,进样量为10 μL,正离子扫描,以氢溴酸高乌甲素为内标,乙酸乙酯作为有机溶剂采用液液萃取法进行定量分析。（2）24只Sprague Dawley（SD）大鼠（雌雄各半）随机平均分为2组。真武汤组按46.88 g/kg灌胃真武汤,附子汤组按1.56g/kg灌胃附子提取物（两组大鼠所使用药液中6种二萜类生物碱浓度相当）,分别于灌胃前和灌胃真武汤后包括0.25h、0.5h、0.75h、1h、1.5h、2h、4h、6h、8h、10h、12h、24 h 共计 13 个时间点经大鼠的眼眶静脉采血,采用HPLC-MS/MS测其血药浓度,采用Phoenix WinNonlin 8.2对6种二萜类生物碱成分的药动学参数进行比较分析。（3）24只SD大鼠随机平均分为正常组与心衰组（异丙肾上腺素诱导）。两组大鼠均按18.75 g/kg灌胃真武汤,眼眶静脉时间点同上,采用Phoenix WinNonlin 8.2对6种二萜类生物碱成分的药动学参数进行比较分析。2.药效学实验将48只SD大鼠,随机平均分为4组:在第1天至第28天,正常组和模型组大鼠（1 ml/只）,卡托普利组（10 mg/kg）和真武汤组（18.75 g/kg）每天灌胃1次;在第1天至第14天,模型组、卡托普利组和真武汤组以5 mg/kg剂量皮下注射异丙肾上腺素进行心衰造模。在第29天,对大鼠进行称重并测算心脏指数,取得心脏包埋切片进行病理学检测。采用试剂盒对大鼠血浆中B型利钠肽含量进行检测。3.均匀设计法优化真武汤组方配伍结合中医理论与现代临床用量把真武汤中的君药附子的量固定为15g,其他四味药作为四个因素,并根据临床常用剂量范围和古方范围设定6个水平。以6种生物碱总量为效应评价指标,对各因素水平进行多元线性回归拟合。结果:1.药动学实验（1）建立并验证了一种高效、灵敏、快速,可同时检测体外及大鼠生物样本中6种二萜类生物碱成分含量的HPLC-MS/MS方法。6种二萜类生物碱在测定范围内线性关系良好（r2>0.9950）。（2）大鼠按灌胃附子提取物和真武汤后,附子组中HA、BAC、BMA以及BHA,真武汤组中有HA以及BMA可在15 min检测到完整的药时曲线。其余成分在血浆中远低于定量下限。其中灌胃附子提取物后,雌性大鼠的次乌头碱的AUC0-∞和Cmax值比雄性大鼠升高2.53倍和1.95倍,而CL比雄性大鼠降低2.80倍。在真武汤组中,雌性大鼠的次乌头碱AUCo-∞和Cmax值比雄性大鼠升高2.85倍和3.03倍,而CL比雄性大鼠降低2.75倍。此外真武汤组大鼠血浆中苯甲酰新乌头原碱的AUC0-∞和Cmax值是附子组的7.78和5.04倍。（3）大鼠灌胃真武汤后,仅有次乌头碱以及苯甲酰新乌头原碱能够检测到完整的药时曲线。其余成分在血浆中远低于定量下限。正常大鼠灌胃真武汤后,次乌头碱的T1/2是心衰大鼠的3.49倍,有统计学差异。2.药效学实验（1）模型组大鼠心脏指数值显著大于正常组（P<0.05）;真武汤组与卡托普利组大鼠心脏指数显著低于模型组（P<0.05）。（2）模型组大鼠血浆BNP含量显著大于正常组（P<0.05）;真武汤组和卡托普利给药后BNP含量均降低（P<0.05）。（3）病理切片检测结果表明:在模型组大鼠心脏中,灶性区域中多见细胞凝固性坏死,间质多量急慢性炎细胞浸润的现象,大量部位出现纤维组织。真武汤及卡托普利上述现象明显减少。3.均匀设计法优化真武汤组方配伍根据回归方程及各回归系数的显著性检验,得到最优回归方程总生物碱量（份/ug）=547.949-2.573*A-1.255*B+9.537*C。A:芍药（g）,B:生姜（g）,C:白术（g）。在置信区95%时,R=0.945,经显著性检验,该回归方程式有统计学意义（P<0.05）。有分析结果可知芍药、生姜和白术的量对真武汤中6种生物碱总含量有显著性影响,而茯苓无显著性影响。即白术的用量与6种生物碱总含量成正相关,芍药和生姜的用量与6种生物碱总含量呈负相关,茯苓的用量对6种生物碱总含量无显著性影响。根据中医理论附子与茯苓搭配有利水作用和心衰病人症状相适应。因此最终确定真武汤优化处方每份为附子15g,芍药9g,生姜9g,茯苓45g,白术45g。结论:（1）建立并验证了同时检测体外及生物样本中6种二萜类生物碱的HPLC-MS/MS方法,可用于附子药动学研究;（2）上述结果表明真武汤中其他药材显著提高了对大鼠对苯甲酰新乌头原碱的吸收,苯甲酰新乌头原碱在异丙肾上腺素诱导的慢性心衰大鼠的入血量有比正常大鼠更高的趋势,次乌头碱有比正常大鼠吸收更低的趋势。（3）采用均匀设计的方法以真武汤中君药附子的6种二萜类生物碱在各提取物中的浓度为主要评价指标,建立真武汤中各味药量与效应指标参数回归模型,通过模型推导得出的最佳方。