三种杀菌剂对小白菜内生细菌多样性的影响

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我国是农药消费大国和生产大国,有资料表明,我国农药污染土壤达1600万hm2,主要农产品的农药残留超标率高达16%~18%。农药污染会影响内生细菌多样性,破坏植物微生态系统的稳定,并可通过食物链影响人体健康。内生细菌是植物生态系统的重要组成部分,对植物功能、植物体内微生态系统的稳定和自然界元素循环等有重要的意义。   随着生物学技术的发展,许多先进的科学技术方法运用到植物内生菌研究中,使得内生菌的研究更加趋于准确和完善。末端标记限制性片段长度多态性技术(Terminal Restriction Fragment Length Polymorphism T-RFLP)是近年来发展起来的不依赖于培养的微生物群落多样性的分析方法之一。该方法有传统方法无可比拟的优越性,它建立在PCR的基础上,不需要分离培养细菌,因而避免了培养方法的弊端。更重要的是该方法可以检测到环境中所有的菌,包括可培养的和不可培养的。   本研究以主要蔬菜栽培种类小白菜为试验材料,应用T-RFLP技术,分析比较了三种杀菌剂代森锌、恶霉灵、农用链霉素分别对小白菜喷雾处理后,其根、茎、叶内生细菌多样性的变化。旨在为合理施用杀菌剂,保证食品安全提供依据。   本研究采用CTAB法直接从植物组织中提取包括内生细菌DNA在内的总DNA,以细菌的16SrDNA为靶基因,通过荧光标记的细菌通用引物对总DNA做PCR扩增,得到的目的条带分别用HhaI和HaeⅢ进行酶切消化,酶切分析结果用peak scanner soffware-v1.0 软件输出,输出结果上传至基于Web的网站(http://trflp.limnology.wisc.edu/index.jsp),通过检索获得每个TRF片段可能代表的微生物。   结果表明:小白菜根部内生细菌较丰富,茎部较少;杀菌剂处理后叶片内细生菌多样性变化最复杂,先刺激后抑制内生细菌多样性;恶霉灵对小白菜茎的影响最大,其内生细菌多样性明显增加,根部内生细菌多样性有所增加,叶部内生细菌多样性先增加后降低;农用链霉素处理后可使小白菜根、茎内内生细菌多样性明显降低,叶片处理后内生细菌多样性先增加后降低,之后趋于平缓;代森锌对小白菜根、茎内生细菌也有抑制作用,对叶片内内生细菌多样性有先刺激后抑制作用。   小白菜根、茎、叶各部分内生细菌群落的优势种群主要为Clostridium(梭菌属)、Fusobacterium(梭菌属)、Halobacillus(喜盐芽孢杆菌属)、Lactobacillus(乳杆菌属)、Nostoc(念珠蓝细菌属)、Sphingomonas(鞘氨醇单胞菌属)、Synechocystis(集胞蓝细菌属)。处理后336h各处理与对照差异不明显,种群结构趋于稳定。
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