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目的淋巴瘤(lymphoma)是源于淋巴造血系统的恶性肿瘤。它包括霍奇金淋巴瘤(Hodgkin’s lymphoma,HL)和非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkin’s lymphoma,NHL),非霍奇金淋巴瘤(NHL)依据细胞来源分为B细胞、T细胞和NK/T细胞NHL,临床大多数NHL为B细胞型。Burkitt淋巴瘤是一种来源于滤泡生发中心细胞的高度侵袭性B细胞NHL,在该肿瘤中,Myc基因因染色体易位而被激活,促进细胞的增殖,从而使得正常的B细胞变为恶性增殖的肿瘤细胞。本课题组前期构建了 c-Myc诱导表达的B细胞淋巴瘤模型,分别在c-Myc激活和失活状态下取肿瘤组织做芯片,检测各种非编码RNA的表达是否发生变化。其中一类特殊的非编码RNA,超保守RNA(T-UCRs)的表达在c-Myc激活后发生了显著改变,uc.477+的表达在c-Myc激活后改变较为明显。本课题旨在研究超保守RNA uc.477+是否受c-Myc调控,并探索它在B细胞淋巴瘤中的作用机制。方法1.构建Myc-on和Myc-off对照的小鼠B细胞淋巴瘤模型,取两组淋巴瘤组织做芯片检测,筛选出表达明显差异的T-UCRs,确定研究对象为uc.477+。从C57BL/6野生型小鼠骨髓中分选出正常B细胞,RT-PCR检测uc.477+在小鼠正常B细胞与小鼠B淋巴瘤细胞(38B9)中的表达,验证芯片结果。2.NCBI查找uc.477+基因上游3000bp序列,设计引物,通过ChIP技术和双荧光素酶报告实验查找并验证uc.477+基因上游是否存在c-Myc结合位点。3.将uc.477+基因片段连接到pMSCV-PIG逆转录病毒表达载体上,构建uc.477+过表达质粒。将477-pMSCV-PIG和空载体质粒pMSCV-PIG经293T细胞包装成逆转录病毒感染小鼠B淋巴瘤细胞38B9,构建uc.477+过表达稳转38B9细胞株。4.体外实验:通过细胞计数检测uc.477+过表达后的38B9细胞株和空载体38B9细胞株在24h、48h、72h的增殖变化;通过流式细胞术检测uc.477+过表达后的38B9细胞株和空载体38B9细胞株细胞周期和凋亡的变化。5.体内实验:uc.477+过表达后的38B9株和空载体38B9细胞株分别细胞计数1×106个,接种至BALB/c小鼠皮下,10天后取肿瘤组织比较大小;Ki-67免疫组化检测uc.477+过表达后的38B9和空载体38B9肿瘤组织的增殖情况。结果1.qRT-PCR显示,与小鼠骨髓正常B细胞相比,uc.477+在38B9细胞中的相对表达水平显著增高,与芯片结果一致。2.ChIP技术和双荧光素酶报告实验证实在uc.477+上游167bp-173bp处有c-Myc的结合位点,c-Myc可转录激活uc.477+的表达。3.成功构建了稳定过表达uc.477+的38B9细胞株和稳转pMSCV-PIG空载体的38B9细胞株。4.体外实验:细胞计数证明在38B9细胞中过表达uc.477+可促进细胞生长;细胞凋亡实验证实在38B9细胞中过表达uc.477+细胞凋亡减少;细胞周期显示过表达uc.477+的38B9细胞株,处于G0-G1细胞减少,G2-M期细胞增多。5.体内荷瘤实验:过表达uc.477+的38B9细胞株与pMSCV-PIG空载体38B9对照组荷瘤相比,过表达uc.477+的38B9细胞肿瘤组织重量与体积明显增大。Ki-67免疫组化实验结果显示过表达uc.477+的38B9肿瘤组织比对照组肿瘤组织中Ki-67的表达量明显增多。结论1.uc.477+上游有c-Myc结合位点,c-Myc可转录激活uc.477+的表达。2.uc.477+在B淋巴瘤细胞中表达增高,在体内和体外,都具有促进B淋巴瘤细胞生长的作用。