乙型肝炎是肝细胞受乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus,HBV）持续损伤而导致的一种慢性疾病,慢性肝炎往往导致严重的结果如肝硬化、肝癌。有数据表明超过80%的肝癌患者来自亚洲和非洲国家,而中国的肝癌患者占50%以上。肝细胞癌是最常见的恶性肿瘤之一,占原发性肝癌的85%～90%。肝癌每年导致近70万人死亡,其中一半发生在中国,这一主要原因是由HBV感染造成的。长链非编码RNA（Long non-coding RNA,LncRNA）参与调节基因或蛋白的表达,很多研究证明LncRNA生长阻滞剂特异性转录5（growth arrest-specific transcript 5,LncGAS5）不仅可以影响细胞增殖、分化以及癌症的进展,且影响病毒复制。已有实验证实LncRNA影响多种病毒的复制。但目前关于LncGAS5是否影响HBV复制的研究还知之甚少。前期实验LncRNA与HBV感染相关LncRNA测序发现LncGAS5明显上调,因此我们猜想LncGAS5可以调控HBV的表达。本实验主要探讨研究LncGAS5调控HBV复制及LncGAS5调节HBV复制的分子机制。研究内容包括以下三个方面:1.HBV感染相关LncRNA测序筛选出LncGAS5明显上调,进一步在HBV阴性细胞系HepG2和HBV稳定表达细胞系HepG2215以及四环素（tetracycline,Tet）诱导的HepAD38（Tet+）和无四环素诱导HepAD38（Tet-）细胞系中验证。2.HepG2215、HepAD38细胞中瞬时转染LncGAS5质粒或小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）敲低 LncGAS5 对 HBV 复制的影响,LncGAS5 的细胞定位。3.LncGAS5影响HBV复制的分子机制及临床意义。方法1.LncRNA与HBV感染相关LncRNA测序;进一步使用qRT-PCR检测HepG2、Hep2215、HepAD38（Tet+）、HepAD38（Tet-）-细胞中 LncGAS5 表达。2.qRT-PCR检测转染LncGAS质粒效率以及转染成功后HBV3.5KbmRNA表达量的变化、siRNA对LncGAS5进行特异性表达干扰效率检测、以及HBV3.5KbmRNA的表达;qPCR检测HBV3.2kbDNA的表达量;ELISA实验方法对瞬时转染LncGAS5质粒和敲低LncGAS5的细胞系进行HBcAg表达量的检测;FISH实验检测LncGAS5的细胞定位。3.生物信息软件预测LncGAS5作用相关的miRNA（miR-222-3p）。qRT-PCR检测细胞 HepG2 和 HepG2215,HepAD38（Tet+）和 HepAD38（Tet-）表达差异。构建 miR-222-3p 质粒对细胞转染,qRT-PCR 检测 LncGAS5、HBV3.5kbmRNA的表达以及ELISA实验方法检测HBcAg表达量;过表达LncGAS5质粒和干扰LncGAS5进行胞质胞核分离实验,使用qRT-PCR检测LncGAS5、miRNA、HBV3.5kbmRNA胞质胞核的表达量;荧光素酶实验检测LncGAS5和miR-222-3p相互作用位点。结果1.HBV感染相关lncRNA-seq筛选出LncGAS5明显上调,qRT-PCR检测HBV阳性和HBV阴性细胞Hep2215是HepG2细胞LncGAS5表达量的4.3倍;HepAD38（Tet-）LncGAS5 表达是 HepAD38（Tet+）约 3.0 倍,两组均 P 值<0.05,存在统计学差异。2.qRT-PCR、qPCR、ELISA检测结果显示过表达和siRNA敲低LncGAS5均可以影响细胞HBV3.5kbmRNA、HBV3.2kbDNA、HBcAg的表达,FISH实验结果显示LncGAS5定位于细胞核。3.miR-222-3p 可以与 LncGAS55 结合,且通过 LncGAS5/miR-222-3p 轴对HBV3.5kbmRNA、HBV3.2kbDNA、HBcAg 进行调控。结论1.LncGAS5在HBV阴性和阳性细胞中差异表达,LncGAS5与HBV存在一定联系。2.LncGAS5影响HBV的复制。3.LncGAS5通过与miR-222-3p结合影响HBV的复制。