【摘 要】
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目的:婴幼儿血管瘤（IH）主要表现大量异常血管的快速生成,而CD93是最新发现的促血管生成因子,已被发现在多种恶性肿瘤中高表达从而促进肿瘤血管生成。本研究旨在探究CD93是否通过促进血管形成方式促进IH的发生与发展,进一步验证CD93多克隆抗体能否抑制血管瘤干细胞（Hem SCs）的血管形成功能,评估CD93是否可作为IH抗血管生成治疗的新靶标。方法:（1）通过组织免疫荧光方法检测CD93在IH组
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目的:婴幼儿血管瘤（IH）主要表现大量异常血管的快速生成,而CD93是最新发现的促血管生成因子,已被发现在多种恶性肿瘤中高表达从而促进肿瘤血管生成。本研究旨在探究CD93是否通过促进血管形成方式促进IH的发生与发展,进一步验证CD93多克隆抗体能否抑制血管瘤干细胞（Hem SCs）的血管形成功能,评估CD93是否可作为IH抗血管生成治疗的新靶标。方法:（1）通过组织免疫荧光方法检测CD93在IH组织和正常皮肤中的表达水平;（2）通过磁珠分选方法筛选CD133+细胞与CD133-细胞,并通过q PCR检测两组细胞干细胞标志物CD133及CD34的表达水平,从而鉴定分选得到的CD133+细胞是否为血管瘤干细胞（Hem SCs）;（3）通过Western blot法检测两组细胞CD93表达水平,并通过体外成管实验对比两组细胞成管功能强弱;（4）通过慢病毒转染的方法构建CD93过表达及干扰的Hem SCs稳转株,通过Western blot及q PCR法验证CD93过表达及干扰效果;（5）以CD93过表达组、CD93干扰组以及阴性对照组细胞进行体外成管实验,对比三组细胞体外成管的血管总长度、节点数就以及网眼数3个指标,观察CD93过表达是否促进细胞的成管功能,CD93干扰是否抑制细胞的成管功能,进一步通过CD93多克隆抗体干扰CD93过表达组细胞体外成管实验,观察CD93抗体能否抑制CD93过表达组细胞的成管功能。结果:（1）增生期IH组织中CD93表达水平高于瘤旁皮肤组织,提示CD93可能参与IH的发生发展过程;（2）通过磁珠分选方法成功分离CD133+及CD133-细胞,CD133+细胞为Hem SCs;（3）CD133+细胞CD93表达水平及体外成管功能均高于CD133-细胞,后续实验采用CD133+Hem SCs进行。（4）通过慢病毒转染成功构建CD93过表达稳转株及三株CD93干扰稳转株,WB及q PCR结果显示CD93过表达组CD93表达水平明显增高,而干扰组明显降低,其中干扰组二为最佳干扰组稳转株,用于后续实验;（5）与阴性对照组相比,CD93过表达组血管总长度、节点数、网眼数均显著增高（p=0.0249,p=0.0325,p=0.0108）,而CD93干扰组血管总长度、节点数、网眼数下降（p=0.0294,p=0.0396,p=0.0288）。CD93多克隆抗体成管阻断实验显示CD93多克隆抗体可抑制CD93过表达组体外成管功能,血管总长度、节点数、以及网眼数均出现明显下降（p<0.05,p<0.01,p<0.01）结论:本研究发现CD93在IH瘤体中高表达。CD93过表达可促进细胞的体外成管功能,而CD93干扰又可抑制细胞的体外成管功能,进一步研究发现CD93阻断性抗体可抑制CD93过表达细胞的体外成管功能,提示CD93是IH潜在的抗血管生成治疗靶标。以往IH的研究中未见CD93相关研究的报道,属源头创新。目前,临床上尚缺乏IH特异性治疗靶标,CD93作为IH潜在的抗血管生成靶标,有望改善IH的治疗现状,具有转化医学前景。
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