NSG1对食管鳞状细胞癌细胞生物学行为的影响及机制探讨

来源 :福建医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tang355402
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背景与目的作为一种极具侵袭性的肿瘤,食管鳞状细胞癌(Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)病情进展迅速,常导致淋巴结转移,呈现高度恶性的生物学行为,是全世界癌症死亡的第六大原因,对人类健康危害重大。目前,针对ESCC大部分治疗手段总体治疗效果欠佳。因此,深入探讨ESCC疾病发生、发展的机制,寻找ESCC相关新的分子靶点,对于提高ESCC患者的生存率、改善预后具有重要的意义。我们的前期研究发现ESCC患者血清存在针对神经元特异性基因家族成员1(Neuron specific gene family member 1,NSG1)的大量自身抗体。NSG1是一种神经元细胞特异性表达、分子量21KDa的核内体蛋白,在神经元中呈高度富集,目前对NSG1的研究主要集中在对神经发育与调控的方面,而对其与肿瘤发生发展的相关性少见关注。免疫组织化学法的检测结果表明NSG1在ESCC患者癌组织存在异常高表达,提示癌组织NSG1的异常表达导致了ESCC患者体内抗NSG1抗体的大量释放,是否NSG1的异常表达参与了ESCC发生、发展的进程值得探讨,为此,本项目组前期通过转染靶向NSG1的si RNA至相对高表达NSG1的ESCC细胞,发现NSG1敲低可明显抑制ESCC细胞的活力、迁移与侵袭,且下调与上皮间质转化(Epithelial mesenchymal transition,EMT)调控密切相关的MEK/ERK通路中关键效应分子ERK蛋白的磷酸化水平,在此研究基础上,本项目组拟(1)构建NSG1过表达的ESCC细胞,从NSG1过表达层面进一步观察NSG1表达改变对ESCC细胞活力、迁移、侵袭的影响(2)通过western blot法检测NSG1过表达/敲低ESCC细胞MEK/ERK通路MEK、ERK磷酸化水平以及EMT相关分子标志物表达的变化,探讨NSG1是否通过MEK/ERK通路影响ESCC细胞的EMT,进而参与ESCC发生、发展的进程。方法1.通过免疫组织化学法检测20例ESCC患者癌组织及配对癌旁组织的NSG1蛋白表达情况。2.采用RT-q PCR和western blot法检测KYSE-150、KYSE-30、KYSE-410、ECA-109、TE-1五种ESCC细胞株NSG1 m RNA和蛋白表达水平,筛选出NSG1相对高表达与相对低表达ESCC细胞用于后续的实验。3.分别转染NSG1过表达慢病毒至相对低表达NSG1的ESCC细胞使NSG1过表达,转染si RNA-NSG1至相对高表达NSG1的ESCC细胞使NSG1表达敲低。采用RT-q PCR和western blot法验证ESCC细胞NSG1过表达/敲低的效果。4.CCK-8法检测NSG1过表达/敲低对ESCC细胞活力的影响。5.Transwell小室法和细胞划痕法检测NSG1过表达/敲低对ESCC细胞迁移的影响。6.Transwell小室法检测NSG1过表达/敲低对ESCC细胞侵袭的影响。7.流式细胞法检测NSG1过表达/敲低对ESCC细胞周期的影响。8.Western blot法检测NSG1过表达/敲低对ESCC细胞MEK/ERK通路p-MEK、p-ERK水平以及EMT相关分子标志物表达的影响。结果1.ESCC患者癌组织NSG1蛋白表达阳性率为90%(18/20),明显高于配对癌旁组织5%(1/20)。(P<0.01)。2.RT-q PCR法和western blot法检测结果显示,NSG1在TE-1细胞中呈相对高表达;在KYSE-150、KYSE-30、KYSE-410、ECA-109细胞中呈相对低表达,且以KYSE-150相对表达量最低。3.RT-q PCR法和western blot法检测结果显示,转染NSG1过表达慢病毒的KYSE-150细胞NSG1 m RNA和蛋白表达水平明显上调;转染si RNA-NSG1的TE-1细胞NSG1 m RNA和蛋白表达水平明显下调。4.与阴性对照(NC)组相比较,NSG1过表达KYSE-150细胞的活力、侵袭、迁移能力明显增强,G0/G1期细胞比例明显降低(P<0.001),S期细胞比例明显增加(P<0.001);NSG1敲低TE-1细胞活力、侵袭、迁移能力明显降低,G0/G1期细胞比例明显升高(P<0.01),S期细胞比例明显下降(P<0.01)。5.与NC组相比较,NSG1过表达KYSE-150细胞的p-MEK、p-ERK表达明显上调,EMT相关转录因子snail、slug和间质标志物Vimentin表达明显上调,上皮标志物E-cadherin表达明显下调;NSG1敲低TE-1细胞的p-MEK、p-ERK表达明显下调,EMT相关转录因子snail、slug和间质标志物Vimentin表达明显下调,上皮标志物E-cadherin表达明显上调。结论1.NSG1在ESCC癌组织异常高表达,NSG1的异常表达可提高ESCC细胞的活力、侵袭、迁移能力,并促进细胞周期的G1/S期转换,表明NSG1的异常表达与ESCC细胞的恶性生物学行为密切相关,提示NSG1可能在ESCC疾病发生发展进程中发挥潜在的致癌作用。2.NSG1可通过激活MEK/ERK通路促进ESCC细胞的EMT,进而参与ESCC疾病发生发展的进程。
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