灵芝（Ganoderma lucidum）因其丰富的药用活性成分,自古以来被广泛应用于食品,药品和临床治疗中。其中,灵芝三萜作为主要的活性成分之一而备受研究者的关注;灵芝三萜含量的高低决定灵芝质量的好坏。灵芝作为一种药用真菌,其生长发育必然受到环境因素的影响,如光、温、空气、营养等。本研究通过模拟灵芝野外生长条件中的光照时长和温度,探究光照时长和温度对灵芝生长及灵芝三萜合成的影响。液体发酵结果表明,32℃与36℃处理通过刺激灵芝三萜含量提高,进而显著提高的灵芝三萜产量,与对照相比分别提高了14.02%与11.6%。而在光照处理试验中,光照处理显著诱导灵芝菌丝生物量增加并提高灵芝三萜产量,其中4 h、8 h和16 h光照时长提高最多,分别是对照的22.59%、23.83%、24.57%。为了进一步提高灵芝三萜产量,利用正交设计综合考虑温度、光照时长和木材降解物三个条件,优化选出最佳处理组合为:36℃、16 h光照时长并添加0.25%D-半乳糖。该组合与对照相比提高灵芝产量达98.32%。本试验通过荧光定量PCR技术分析光照温度条件对灵芝三萜合成途径中关键酶基因表达水平的影响。在温度高低、光照时间长短和不同处理组合诱导下,关键酶基因对其响应程度也不尽相同,但分析结果表明,温度和光照处理显著上调灵芝三萜合成途径中HMGR、SQS和LAS的表达水平。为了进一步探究光照和温度对灵芝三萜合成影响的内在机制,本研究利用流式细胞术检测灵芝菌丝体胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）含量,试验结果表明:光照和温度处理能够显著诱导灵芝胞内ROS含量的积累。进一步检测处理样品中抗氧化酶活性发现,温度处理能够提高超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase SOD）活性,SOD将ROS降解为H2O2,而光照处理则通过提高吲哚乙酸氧化酶（Indoleacetic acid oxidase IAAO）活性清除过多的氧自由基。推测温度与光照可能是通过不同的机制对灵芝三萜合成产生影响,温度处理是否通过将H2O2作为信号传导分子影响三萜合成,光照处理是否会影响灵芝体内相关激素的合成与分解等有待进一步的试验验证。