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目的:通过研究CHOP过表达后对小鼠肝癌细胞增殖和凋亡及对Cdc25C的影响,初步探讨CHOP、Cdc25C和肝癌之间的关系,为深入研究Cdc25C在肝癌发生和发展中的作用机制提供依据。方法:(1)构建CHOP慢病毒载体(LV-CHOP),用于转染小鼠肝癌Hepa1-6细胞系作为实验组(LV-CHOP-Hepa1-6),转染慢病毒空载体的Hepa1-6细胞作为阴性对照组(LV-Hepa1-6),未转染的Hepa1-6细胞作为空白对照组(Hepa1-6),通过RT-PCR和Western blot技术检测各组Hepa1-6细胞中CHOP的表达。(2)通过CCK-8法和划痕修复实验检测各组Hepa1-6细胞的增殖和迁移能力。(3)通过流式细胞术检测各组Hepa1-6细胞的细胞周期。(4)流式细胞术和Western blot法检测各组Hepa1-6细胞的凋亡情况。(5)通过Western blot法检测各组Hepa1-6细胞中内质网应激反应标志物GRP78蛋白的表达。(6)qRT-PCR法检测各组Hepa1-6细胞中Cdc25CmRNA的表达;Westerm blot和免疫荧光染色检测各组Hepa1-6细胞中Cdc25C蛋白质表达。结果:(1)成功构建了 LV-CHOP慢病毒载体,转染小鼠肝癌Hepa1-6细胞后,CHOP基因及其蛋白质表达水平明显高于阴性对照组和空白对照组,获得CHOP过表达的小鼠肝癌细胞。(2)CCK-8法检测结果显示,上调CHOP表达后,可抑制小鼠肝癌细胞的增殖。与两种对照组比较,差异具有显著性统计学意义(P<0.01);(3)划痕修复实验中三组小鼠肝癌Hepa1-6细胞培养12h时,细胞修复率无明显差异(P>0.05);在培养24h时,LV-CHOP-Hepa1-6实验组细胞修复率低于Hepa1-6和LV-Hepa1-6对照组,差异具有统计学意义(P<0.01);(4)流式细胞术检测细胞周期的结果显示,CHOP表达上调后,G0/G1期细胞增加(P<0.05),S期细胞明显减少(P<0.01),G2/M期细胞所占百分比无统计学差异(P>0.05);(5)流式细胞术检测结果显示,CHOP表达上调后,可明显促进小鼠肝癌细胞凋亡(P<0.01);Western blot结果显示,CHOP表达上调后,凋亡蛋白caspase-3、Bax蛋白质表达增加,抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白质表达减少(P<0.05)。(6)Western blot法检测结果显示CHOP表达上调后,内质网应激反应标志物GRP78蛋白质表达增加(P<0.05)。(7)qRT-PCR法检测发现LV-CHOP-Hepa1-6实验组小鼠肝癌Hepa1-6细胞中Cdc25C mRNA水平低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);Westerm blot和免疫荧光细胞化学染色法检测发现,LV-CHOP-Hepa1-6实验组小鼠肝癌Hepa1-6细胞中Cdc25C蛋白质表达低于对照组(P<0.05)。结论:内质网应激反应特异性转录因子CHOP过表达时,可减弱小鼠肝癌细胞的增殖和迁移,通过诱发内质网应激反应促进细胞凋亡,并降低肝癌相关抗原Cdc25C的表达。