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目的观察体外条件下凝血酶对大鼠骨髓间充质干细胞的损伤作用、细胞碱性磷酸酶活性的变化以及细胞内ERK1/2、p-ERK1/2蛋白的表达的影响,同时采用三七皂苷进行干预,判断三七皂苷干预是否能够对凝血酶损伤的骨髓间充质干细胞有保护作用。方法首先通过全骨髓培养法培养正常SD大鼠的骨髓间充质干细胞并进行传代、纯化及鉴定。通过MTT法确定凝血酶对细胞损伤的时间及浓度后,取生长良好的第3～8代骨髓间充质干细胞,随机分为6组,分别为PNS200组(三七皂苷200 μg/ml +凝血酶 12.5U/ml)、PNS100 组(三七皂苷 100μg/ml +凝血酶12.5U/ml)、PNS50 组(三七皂苷 50μg/ml+凝血酶 12.5U/ml)、PNS25 组(三七皂苷25μg/ml+凝血酶12.5U/ml)、损伤对照组组(凝血酶12.5U/ml)及正常对照组。6个组在相同条件下培养4小时后,测定其碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,Western blotting 法检测细胞 ERK1/2、p-ERK1/2 蛋白的表达。结果1.损伤对照组细胞ALP活性较正常对照组显著下降,有显著统计学意义;药物干预组ALP活性较正常对照组活性下降,有显著统计学意义;药物干预组细胞ALP活性均高于损伤对照组,有统计学意义。药物干预组之间ALP活性未见明显差异。2.6个实验组ERK1/2蛋白表达水平差异无统计学意义。损伤对照组p-ERK1/2较正常对照组显著下降,有显著统计学意义;各个PNS干预组细胞p-ERK1/2均高于损伤对照组,差异具有统计学意义。PNS25组和PNS50组p-ERK1/2明显高于正常组。结论一定浓度的凝血酶可以损伤骨髓间充质干细胞,导致骨髓间充质干细胞碱性磷酸酶活性下降,p-ERK1/2表达降低。三七皂苷对凝血酶损伤骨髓间充质干细胞及其碱性磷酸酶活性有保护作用,可上调其p-ERK1/2蛋白的表达。三七皂苷对凝血酶损伤骨髓间充质干细胞的保护作用可能是通过活化ERK信号通路实现。