【摘 要】
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食用菌生产产生大量菌糠,直接废弃容易产生环境污染等问题,而菌糠中含有多糖活性物质,提取其中多糖不仅可以有效的利用菌糠,减少环境污染,而且可以延长食用菌的产业链。本课题优化了茶树菇菌糠多糖（Polysaccharides from Agrocybe cylindracea residue,PACR）的提取条件,分析了PACR的单糖组成等结构,检测了PACR的体外抗氧化活性,验证了基于p38 MAPK
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食用菌生产产生大量菌糠,直接废弃容易产生环境污染等问题,而菌糠中含有多糖活性物质,提取其中多糖不仅可以有效的利用菌糠,减少环境污染,而且可以延长食用菌的产业链。本课题优化了茶树菇菌糠多糖（Polysaccharides from Agrocybe cylindracea residue,PACR）的提取条件,分析了PACR的单糖组成等结构,检测了PACR的体外抗氧化活性,验证了基于p38 MAPK信号通路其对T2DM小鼠肝脏和结肠的改善作用。研究结果如下:（1）PACR的提取优化。通过PB和响应面试验,确定了PACR的最佳提取条件为提取温度89.98℃,提取次数1.46次,p H=8.02,在此条件下多糖预测得率为2.24%。为了方便试验操作,将提取条件设为提取温度90℃,提取次数1次,p H=8,在此条件下,PACR的理论得率为2.24%,实际得率为2.23%。经去蛋白、脱色素、透析和冷冻干燥等步骤得到纯化的PACR。（2）PACR的结构分析和单糖组成。PACR由甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖和岩藻糖10种单糖组成,其组成比例为13.69:4.23:4.61:6.31:1.98:17.33:24.03:8.78:11.18:7.86。甘露糖、葡萄糖和半乳糖是组成PACR的主要单糖。PACR的FT-IR显示,PACR有羧基（-COOH）,环醚键（C-O-C）伸缩振动和羧基（C-O-H）可变角度振动,并且是吡喃糖。（3）PACR的体外抗氧化活性。PACR对还原力、超氧阴离子、DPPH和羟基自由基的清除率达到0.08±0.01、22.40±1.50%、25.50±1.13%和28.30±1.09%。PACR的体外抗氧化能力与剂量浓度呈正相关,表明PACR具有较强的体外抗氧化能力。（4）PACR对T2DM小鼠的肝脏和结肠的改善作用。（1）经高剂量PACR（400 mg/kg）干预后,增强了体内抗氧化酶SOD,CAT和GSH-Px的活性,降低了MDA的含量,说明PACR可以减轻肝脏和结肠的损伤,对维持氧化还原平衡有一定的调节作用;（2）PACR能够降低肝脏和结肠指数。通过H＆E组织病理学观察,可以看出,PACR能够减轻肝脏细胞中的炎性细胞浸润现象,修复核膜和肝小叶结构紊乱的现象。并且PACR能够修复结肠肠腺,对结肠的肌肉层有一定的修复作用,改善细胞排列紊乱的情况;（3）PACR能够改善肝脏和结肠中的胰岛素抵抗水平（IRS1、IRS2）,降低炎症因子的表达（IL-6、IL-1β）;（4）从免疫荧光试验中,可以看到T2DM激发了p38 MAPK信号通路,PACR干预后下调了p-p38的表达;（5）Western-blot试验表明PACR能抑制p38 MAPK信号通路的激活,下调p-p38的水平,p-p38/p38的比值降低,同时PACR能够降低TNF-α的表达水平,从而能够起到抗炎、抗氧化和降血糖的作用。综上所述,表明了PACR具有一定的抗氧化、抗炎症和改善糖尿病的作用,能够在一定程度上通过抑制p38 MAPK信号通路的激活从而对损伤的肝脏和结肠起到一定的修复和改善作用,为天然降血糖药物开发提供了新思路。
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