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国家二级保护植物蒜头果是广西及云南特色林产资源,其蒜头果油中富含的神经酸为超长链单不饱和脂肪酸,具有多种生理药理活性,经济价值高,被广泛应用于食品、医药等领域。本文在建立5种混合脂肪酸的定性及定量分析基础之上,利用从蒜头果枝、叶及果实中分离的内生真菌对神经酸结晶母液进行了发酵产富含神经酸微生物油脂的研究。结果如下:1.神经酸结晶母液含有的脂肪酸主要有硬脂酸、油酸、花生酸、芥酸和神经酸。为了跟踪监测蒜头果内生真菌发酵神经酸结晶母液产微生物油脂中这5种脂肪酸的变化,建立了用气相色谱法同时定量测定这5种脂肪酸组分的分析方法。采用Rtx-Wax@柱(30 m×0.25 mm,0.25 μm),升温程序为初始温度180℃,保留1 min,以5 ℃/min升至240℃,保留9 min。结果显示该法准确、可靠,可用于神经酸结晶母液发酵过程监控及后续工艺优化的测定。2.采用组织贴片和研磨涂布平板培养法对蒜头果健康的枝、叶、果肉、果壳及果仁内生真菌进行分离纯化。结果分离得到内生真菌58株。58株菌株的菌丝体经苏丹黑-B染色后镜检观察油脂粒着色情况初筛得到产油脂含量较高的菌株19株。初筛菌株经摇瓶液体培养,气相色谱定量分析微生物油脂中神经酸等脂肪酸的含量,复筛得到2株能发酵产富含神经酸油脂的目的菌株STGR-6和STGK-3。内生真菌STGR-6经鉴定为奥氏青霉菌(Penicillium olsonii),STGK-3经鉴定为黄曲霉(Aspergillus flavus)。3.重点考察了奥氏青霉菌STGR-6发酵产富含神经酸微生物油脂的工艺条件,研究了培养基配方等对发酵的影响。研究结果表明,适宜的发酵条件为:培养基为改良马丁培养基,装液量为40mL/250mL三角瓶,加入神经酸结晶母液浓度为3.75 g/L,在pH为7.5,30℃摇床培养5 d,摇床转速为200 r/min。在该条件下,其菌体生物量达28.5 g/L,干菌体中神经酸含量55.29 mg/g。在枝叶培养基和果仁培养基添加油酸及芥酸的混合底物发酵培养时,有一定量的神经酸在菌体内形成。以单一脂肪酸油酸或芥酸为底物时,发酵后菌体内未检测到神经酸。以油酸、神经酸混合溶液为底物时,发酵后油脂中神经酸的量未增加。以芥酸、神经酸的乙醇溶液为底物时,底物芥酸含量大于50%菌体生长受到抑制,小于50%菌体生长良好但神经酸被作为营养物质被消耗。4.选择适宜的条件分别对内生真菌STGR-6、STGK-3进行扩大培养,采用索氏抽提法获得微生物油脂。发酵放大实验中,STGK-3生物量达8.31 g/L,油脂含量为44.85%,较初筛油脂含量提高23.43%,油脂中神经酸含量为20.34%,神经酸产率83.43%。奥氏青霉菌STGR-6生物量达13.69 g/L,油脂含量为23.97%,较初筛油脂含量提高6.72%,油脂中神经酸含量为26.67%,神经酸产率87.95%。分别对两种微生物油脂进行气-质分析,其油脂主要成分为油酸、芥酸及神经酸。