【摘 要】
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背景和目的: 食管癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,其五年生存率低于10%,发病率分别位居我国和世界的第四位和第八位,每年全世界新发食管癌病例的一半都发生在我国。食管癌是严
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背景和目的: 食管癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,其五年生存率低于10%,发病率分别位居我国和世界的第四位和第八位,每年全世界新发食管癌病例的一半都发生在我国。食管癌是严重威胁人类健康的疾患之一,但是迄今为止,人们仍然不清楚食管癌发生发展的分子机制。目前,食管癌研究的主要方向之一就是找到影响食管癌发生发展的关键基因或比较特异的生物分子标志物,确定食管癌的遗传易感因素,并阐明其作用的分子机理。所以,食管癌相关新基因的克隆和鉴定对于食管癌易感个体的预警、临床早期诊断、治疗、预后监测以及新的抗肿瘤药物的研制都具有重要的意义。 ECRG4(GeneBank AF 325503)是中国医学科学院肿瘤研究所利用差异显示PCR(DD-PCR)法,从正常食管组织和高癌家族中分离出的一条差异表达序列,其在正常组织表达,在食管癌组织和肿瘤细胞系中表达下调。且该基因核心启动子区分布有大量的CpG岛,其甲基化状况与ECRG4在食管癌中的表达下调具有正相关性,推测其可能是新的候选抑癌基因的片段。 本课题通过生物信息学分析,对ECRG4的基本结构特征和功能进行了预测,并且从原核表达和真核表达两方面对ECRG4进行了初步功能研究,以期为食管癌的基因治疗提供新的实验依据。 方法: 1.建立和改善了ECRG4蛋白的原核高效表达体系及纯化方法。通过生物信息学分析:ECRG4蛋白N端有30个氨基酸组成的信号肽,具有极强的疏水性。在表达过程中极易形成包涵体,且在复性的过程中容易析出,从而增大了活性蛋白获取的难度。我们截去ECRG4前端的疏水性跨膜区的28个氨基酸,通过DNA
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