柑橘炭疽病菌拮抗微生物的筛选、鉴定及防病效果研究

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由于柑橘成熟后代谢旺盛,病原微生物的潜伏侵染,造成了流通过程中较大损耗,严重制约了柑橘产业发展。由胶孢炭疽菌[Colletotrichum gloeosporioides(Pcnz.)Sacc.]侵染引起的柑炭疽病(citrus anthracnose)是柑橘采后的主要病害之一。目前,防治柑橘采后病害多采用化学杀菌剂处理的方法,该方法会引起产品污染以及危害人体安全。此外,经常使用一种化学杀菌剂处理采后的柑橘,柑橘采后病害的病菌对该化学药剂抗会产生抗性,导致防病效果下降。因此,迫切需要开发新的高效、环保、无毒的生物保鲜剂,以取代或减少化学杀菌剂在柑橘采后保鲜中的使用。   本研究从不同环境中分离筛选出有效防治柑橘采后炭疽病的拮抗菌的基础上,对拮抗菌进行分类鉴定,并初步探讨其拮抗机理,以期为利用生物防治方法控制柑橘采后病害提供依据。主要研究结果如下:   1.从不同作物的根、茎、叶、果及根际土壤中共分离到了571株菌株,从中筛选出对柑橘炭疽病有较好抑制效果的4株拮抗细菌(T132、T226、1404、1505)。根据形态学特征、生理生化反应和16S rDNA测定结果,将菌株T132鉴定为越南伯克霍尔德氏菌(Burkholderia vietnamiensis),菌株T226鉴定为产酶溶杆菌(Lysobacterenzymogenes),菌株1404鉴定为短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis),菌株1505鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。   2.采用柑橘果实刺伤挑战接种和拮抗菌液直接浸泡健康果实两种方法研究拮抗菌对柑橘炭疽病的抑菌防病效果。结果表明,无论是刺伤接种还是直接浸泡,4株拮抗菌都能较好地控制采后柑橘炭疽病的为害。刺伤接种试验中,柑橘室温贮藏20 d后,拮抗菌菌株T132、T226、1404、1505对炭疽病防效依次为88.2%、78.2%、64.9%、52.1%,而阳性对照咪鲜胺(浓度200 mg/L)的防效为85.7%,低于菌株T132的防效。直接浸泡试验表明,在室温下贮藏60 d,菌株T132和T226的防效分别为54.9%和61.3%,分别比咪鲜胺的防效(49.1%)高5.8和12.2个百分点;菌株1404与1505防效虽然不及咪鲜胺,但使用后病情明显轻于对照。   3.测定拮抗菌株代谢产物的抑菌活性,结果表明:4株拮抗菌的发酵原液都能不同程地抑制柑橘炭疽菌的生长,但其121℃高温灭菌发酵液都无拮抗活性;菌株T132、T226与1404的去菌体发酵液对柑橘炭疽菌有一定的拮抗活性,而菌株1505的去菌体发酵液无拮抗活性。对拮抗菌株产酶能力测定结果表明:4株拮抗菌都能产生蛋白酶;除了菌株1404以外,其它3株拮抗菌(T132、T226、1505)均分泌纤维素酶:4株拮抗菌均不产生几丁质酶。采用对峙培养法测定了拮抗菌株对柑橘炭疽菌菌丝生长的影响,通过显微镜观察,菌株T132、1404与1505对炭疽菌菌丝的生长均引起菌丝不同形态的畸形、原生质凝结、内含物外溢等现象;菌株T226不引起柑橘炭疽菌的菌丝发生畸变。
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