人FAM33A基因启动子的克隆与鉴定

来源 :重庆医科大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:deiseng
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FAM33A(family with sequence similarity33 A),也称Ska2(spindle and KT associated2),是一个最近鉴定的参与细胞增殖和细胞周期的新分子。PRR11(proline rich11),是2004年第一次从人全长cDNA中全部测序鉴定,在定位于17号染色体一个富含脯氨酸的新基因。为了进一步深入研究其转录调控机制,本研究首次克隆鉴定了PRR11和FAM33A基因的启动子区域。 首先应用5 RACE技术鉴定了FAM33A基因的转录起始位点。然后通过PCR定向克隆、酶切亚克隆等策略,构建了覆盖PRR11和FAM33A基因5’端侧翼区起始密码子ATG附近约2.5 kb区域的一系列PRR11和FAM33A基因启动子荧光素酶报告基因重组体。启动子活性分析表明,FAM33A基因启动子区域主要定位于转录起始位点附近约590 bp的区域内,而PRR11基因启动子在与FAM33A基因重叠区域具有活性,该区域可能是参与PRR11与FAM33A启动子调控。采用转录因子结合位点预测分析软件分析表明,FAM33A基因启动子区域含有典型的GC盒以及Sp1、E2F和GATA-1等潜在的转录因子结合位点,提示Sp1和E2F等转录因子可能参与FAM33A基因的转录调控。
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