猪卵母细胞体外成熟中PLIN3对脂滴的影响及PGC7的动态变化

来源 :南京农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:bojielinlinbojiebjbj
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
猪卵母细胞的体外成熟在很多生物技术中都有应用,其中包括胞质成熟、核成熟和表观成熟,影响卵母细胞成熟的因素有很多,比如体外成熟环境、体外成熟液成分、自身的新陈代谢、卵母细胞与卵丘细胞之间的交流及自身相关母源因子的调控作用。其中,猪卵母细胞脂质含量极高,脂质代谢尤其重要,而PLIN3是一种与脂滴代谢相关的蛋白质,本研究拟对猪裸卵/卵丘细胞单独培养、裸卵与卵丘细胞共培养、卵丘-卵母细胞复合体(COCs)体外培养,观察PLIN3的变化,来初步探索PLIN3对脂滴的调节机制。PGC7是一种母源因子,有报道指出PGC7与卵母细胞成熟过程中染色质的凝聚相关,也会影响表观遗传修饰,因此,通过观察成熟过程中PGC7和表观遗传修饰的变化,来初步探索PGC7是否会通过影响表观遗传修饰来调控成熟过程。1 PLIN3在猪卵母细胞成熟中的作用机制本实验对卵母细胞和卵丘细胞进行不同模式下的体外培养,结果发现在成熟过程中存在大量的脂滴和PLIN3,说明成熟过程中可能需要脂滴代谢提供能量。裸卵组比未成熟和COC组成熟的卵母细胞中的脂滴明显小很多,未成熟和COC组卵母细胞中的脂滴仅分布在胞质,核周围分布较少,而裸卵组卵母细胞中的脂滴比较均匀,在核周也存在,说明成熟过程中脂滴会发生一系列的变化并且受到卵丘细胞的影响。卵母细胞中,PLIN3蛋白紧密包围在脂滴周围,但是未成熟和COC组卵母细胞核区无脂滴分布,却有PLIN3蛋白的存在;卵丘细胞中脂滴和PLIN3未呈现明确的位置关系,说明PLIN3不仅仅存在于脂滴表面,也存在于胞质中。体外成熟液中添加的卵泡液对于各组成熟卵母细胞中PLIN3的表达无影响,各组成熟后的卵母细胞中PLIN3 mRNA和蛋白的表达显著降低(P<0.05),卵母细胞成熟后三酰甘油的含量也明显降低(P<0.05),但是成熟模式不同没有影响;卵丘细胞经体外培养后PLIN3 mRNA和蛋白的表达显著升高(P<0.05),其中单独培养组PLIN3 mRNA表达最高,说明卵母细胞和卵丘细胞中脂滴代谢模式可能不同。PLIN3的表达模式与三酰甘油含量的变化呈平行关系,所以PLIN3可能会通过影响三酰甘油的累积控制脂滴代谢,缝隙连接虽然不会影响卵母细胞成熟中PLIN3的表达,但会影响卵丘细胞中PLIN3的表达。2 母源因子PGC7对猪卵母细胞成熟中表观修饰的影响猪卵母细胞体外成熟中,随着减数分裂的进行,极体的排出,我们发现PGC7和OCT4在染色体上会出现集中表达的现象,其中第一极体上PGC7和OCT4的表达、DNA甲基化、组蛋白H3K4和H3K9的甲基化水平、组蛋白H4K12和H4K16的乙酰化水平都要比细胞核高;PGC7、OCT4、DNMT1、DNMT3b、TET1、TET2 和TET3 mRNA的表达逐渐上升。而成熟中用细胞松弛素B(CB)处理抑制第一极体的排出后,处理24h后,这些基因的mRNA水平显著降低(P<0.01),处理45h后又恢复正常水平;PGC7和OCT4在染色体上没有集中表达的现象;DNA甲基化状态基本没变,由于染色体没有分离,所以DNA甲基化水平在染色体上也就无高低之分;在染色体缩短变粗时组蛋白H3K9的二甲基化(H3K9me2)没有消失,组蛋白H4K12也没有发生去乙酰化。说明如果极体排出受到抑制,成熟受到影响,会引起PGC7和OCT4表达的异常,表观修饰(DNA甲基化和组蛋白修饰)也会发生一系列变化。如果用组蛋白去乙酰化酶抑制剂(TSA)处理后,PGC7、OCT4、DNMT1、DNMT3b、TET1、TET2和TET3 mRNA的整体表达趋势不会受到影响;卵母细胞成熟中组蛋白乙酰化的动态模式被打乱,染色体缩短变粗时组蛋白H4K12没有发生去乙酰化。在TSA处理组卵母细胞的成熟中,H3K9me2和H3K27me3—直存在,没有发生去甲基化;与对照组一样,DNA甲基化一直存在;PGC7和OCT4在染色体上也没有集中表达的现象;卵母细胞的极体排出受到抑制,成熟受到影响。说明表观修饰发生异常,也会影响PGC7和OCT4的表达,影响卵母细胞成熟。因此,PGC7和OCT4可能会与组蛋白修饰共同作用,参与卵母细胞的成熟调控。
其他文献
农民培训可以形成农村人力资源优势,对农民进行培训尤为重要。通过培训可以提高农民的文化素质,科技素质、把科技运用在田间劳作中,符合产业化经营的新时代需要。我国是一个
解放战争时期,为瓦解国民党军队士气,推动解放战争进程,我们党对国民党军队展开了大规模的政治攻势.参与开展政治攻势的主体主要有我们党的敌工部门、国民党军俘虏以及人民群
凹凸棒石添加于饲料中可以提高家禽的生产性能、抗氧化性能、免疫机能,改善家禽肠道屏障的完整性和功能,同时还能降低重金属在体内的沉积。凹凸棒石通过改性后,其表面性质发
作为猪最重要的两类脂肪性状,背膘厚与肌内脂肪含量对猪的肉品质影响很大,降低背膘厚度并提高肌内脂肪含量是改善肉质的有效途径。ACSL1基因对动物的脂肪沉积有着重要的影响,
目的:分析结核性后凸截骨矫形术后PJK的发生率及危险因素。方法:对2012年1月至2018年1月在我院行截骨矫形治疗的63例结核患者进行回顾性分析。术后随访中发生PJK的患者有19例,发生率30.6%。收集两组的基本临床数据和临床功能评分,与操作有关的参数,包括术前与末次随访时后凸Cobb角、术前与术后3个月及末次随访时PJA角度、固定节段、病变椎体数量;收集螺钉松动、断棒、脑脊液漏、胸水、再手术
改革开放以来,我国城镇化进程便不断加快,并取得了举世共睹的成绩。征迁是城镇化发展的需要。征迁牵涉到农民的核心利益,会引发各种矛盾。本文主要对新型城镇化进程中,征迁工
我国目前荞麦机械化水平较为落后,我国在荞麦生产机械方面进行了相关的开发和应用工作,但是仍落后于小麦、水稻和玉米等谷物的机械化发展,脱粒过程主要采用小麦、油菜等作物的脱粒装置,存在脱粒强度大,效率低,籽粒浪费严重等问题,影响荞麦的脱粒效率和脱粒质量,针对以上问题,研究设计了一种荞麦小区脱粒机。其主要研究结论有:(1)根据荞麦的生长特性,设计了长为820mm,直径为550mm的纹杆闭式切流脱粒滚筒,解
船舶尾轴承作为船舶推进系统的核心组成部分,其摩擦磨损性能对船舶在海上运行的经济性和安全性有着至关重要的作用。随着水润滑尾轴承的不断发展,不同种类的高分子聚合物被应用于尾轴承上。在实际的使用过程中,尤其是在启动、停止、低速重载等的工况条件,聚合物材料有着较为严重的摩擦磨损。因此,通过对聚合物材料进行改性,提升材料的摩擦学性能是势在必行的。本文通过对铁犁木的微观结构进行观测,在铁犁木的内部发现了一种树
摘要:基于可饱和吸收体的全固态脉冲激光器由于其结构简单、成本低廉、操控简便等特点被广泛研究和使用。Fe_3O_4纳米颗粒(FONP)作为一种新型的可饱和吸收体,由于其具有半导体特性、较大的三阶非线性极化率、带隙宽度可调及超宽的工作带宽等特性,使其备受关注。本文研究了FONP在1.3μm全固态激光器中的应用,利用自行制备的FONP可饱和吸收体在1.3μm全固态Nd:YVO_4激光器中实现了脉冲输出;
1934年开始的新生活运动是一场以“规矩、清洁”为目标的生活习惯改革运动。妇女界成立了新生活运动促进总会妇女指导委员会(简称“妇指会”),隶属于新生活运动促进总会。作为全国组织领导妇女工作和妇女运动的总机构,“妇指会”带领广大妇女投身新生活运动中,并出版编印《妇女新生活月刊》。《妇女新生活月刊》是反映女性议题的重要平台。除了报道国内外妇女生活的状况,还介绍了大量关于女性个人、家庭卫生、抚育儿童等相