白血病是一种常见的严重危害人类健康的造血系统恶性肿瘤。慢性粒细胞白血病（chronic myeloid leukemia,CML）是一种造血干细胞克隆增殖性疾病,为常见的造血系统恶性肿瘤。约95%的CML患者具有Ph染色体,由此产生的p210bcr/abl癌性融合蛋白在CML的发病中起着十分重要的作用,磷酸化p210bcr/abl癌性融合蛋白可以通过ABL酪氨酸蛋白激酶活性发挥其促进肿瘤细胞增殖、存活和抑制肿瘤细胞凋亡的生物学功能。格列卫（Gleevec,imatinib,STI571）是特异性针对bcr-abl的酪氨酸激酶抑制剂,对Ph+的CML患者具有良好的疗效,可使CML患者得到完全或部分血液学和细胞遗传学缓解,并于2001年获美国FDA推荐成为Ph+CML的一线药物。但同年,临床出现格列卫耐药现象也有报道,由于格列卫需要持续用药才能维持药效,出现耐药性将严重影响临床治疗的有效性。因此,寻找新的p210bcr/abl癌性融合蛋白抑制剂仍然十分必要。小檗胺（Berbamine,BBM）为一种新型的钙调素拮抗剂,目前已广泛用于治疗各种原因引起的白细胞减少症。近年来国内外研究发现,BBM对多种肿瘤细胞如黑色素瘤细胞、前列腺癌细胞、宫颈癌细胞、白血病细胞等均有明显的增殖抑制作用。我们的研究小组先前的研究也发现,BBM能抑制慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞的增殖和诱导其凋亡,并对K562细胞p210bcr/abl癌性融合蛋白的表达有明显下调作用。尤其有意义的是BBM对K562细胞格列卫耐药株K562/G01细胞的生长同样具有明显的抑制作用,但其作用分子机制仍不十分清楚。本研究在前期工作的基础上应用体外细胞培养体系,MTT测定细胞活力法、流式细胞术、RT-PCR、免疫印迹等技术,采用不同浓度BBM处理K562/G01细胞不同时间段后,研究其对K562/实验细胞为人慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞和其格列卫耐药株K562/G01细胞,采用MTT法检测不同浓度格列卫和BBM作用K562、K562/G01细胞24h、48h后的增殖抑制作用,计算格列卫和BBM对K562、K562/G01细胞的24、48 h IC₅₀浓度:应用Annexin V-FLUOS/PI试剂盒和流式细胞术定量分析不同浓度BBM（0、4μg/ml、8μg/ml、16μg/ml）作用K562/G01细胞24h后细胞凋亡率;采用半定量RT-PCR方法检测10μg/ml BBM作用K562/G01细胞不同时间段（0、6h、12h、24h）后BCR/ABL和TCF7、c-MYC、c-JUN等基因mRNA水平的表达;用Western blots免疫印迹法半定量分析8μg/ml、10μg/ml BBM分别作用K562和K562/G01细胞不同时间段（0、6h、12h、24h）后p210bcr/abl总蛋白（c-abl抗体）、磷酸化p210bcr/abl（磷酸化c-abl抗体）蛋白的表达情况:10μg/ml BBM作用K562/G01细胞不同时间段（0、6h、12h、24h）NF-κB（P65抗体）核内量、总量和IκB蛋白总量的表达情况。结果（1）K562/G01细胞对格列卫耐药的检测:1μg/ml格列卫作用于K562细胞和K562/G01细胞48h后抑制率分别为31.82%和91.87%,格列卫对K562细胞和K562/G01细胞48h的IC₅₀值分别为0.19μg/ml和3.25μg/ml,K562/G01细胞对格列卫耐药倍数是K562细胞的17.22倍。（2）BBM对K562细胞和K562/G01细胞的增殖抑制作用:8μg/ml BBM处理K562细胞24、48h后的抑制率分别为53.52%、58.43%。8μg/ml BBM处理K562/G01细胞24、48h后的抑制率分别为36.34%和57.60%,BBM作用K562、K562/G01细胞24h IC₅₀分别为5.02μg/ml和9.07μg/ml;48h的IC₅₀分别为3.28μg/ml和4.43μg/ml。（3）BBM对K562/G01细胞诱导凋亡作用:4μg/ml、8μg/ml、16μg/ml BBM作用于K562/G01细胞24h后,细胞凋亡率从13.9%分别增加至42.21%、69.30%和79.58%。（4）BBM对K562/G01细胞BCR/ABL融合基因mRNA水平和蛋白水平p210、磷酸化p210表达的影响:8μg/ml BBM和10μg/ml BBM分别处理K562细胞和K562/G01细胞后,K562、K562/G01细胞mRNA水平BCR/ABL融合基因和蛋白水平p210、磷酸化p210表达均有明显的下调。K562/G01细胞经10μg/ml BBM作用6h后mRNA水平BCR/ABL基因与其β-actin的比值从0.491887降至0.036136,p210含量与其β-actin的比值从0.944降至0.0279,磷酸化p210含量与其β-actin的比值从1.292降至为0。（5）BBM对K562/G01细胞NF-κB（p65）和IκB蛋白表达的影响:10μg/ml BBM处理K562/G01细胞后,核内p65的表达量明显下调,6h后核内NF-κB（p65）蛋白与Lamin B的比值从0.382降至0.006;IκB的表达明显上调,IκB蛋白与其β-actin的比值经BBM作用6h后从0.004升至0.163;BBM作用前后K562/G01 NF-κB（p65）细胞总蛋白表达量无明显改变。（6）10μg/ml BBM作用K562/G01细胞后,mRNA水平TCF7、c-MYC表达明显受抑,c-JUN mRNA表达上升。其中,TCF7mRNA与β-actin的比值从0h的0.247446降为12h的0.032716;c-MYCmRNA 12h时与β-actin的比值为0.211018,而0h时为0.733604;c-JUNmRNA与β-actin的比值0h为0.001173,24h时为0.138436。结论（1）BBM可以明显抑制K562、K562/G01白血病细胞的增殖,诱导细胞凋亡。（2）BBM是一种p210bcr/abl蛋白磷酸化抑制剂,能抑制格列卫耐药细胞株K562/G01细胞BCR/ABL基因在转录水平和蛋白水平的表达,同时也显示对磷酸化p210蛋白表达有明显的抑制作用。（3）BBM可下调K562/G01细胞核内NF-κB（p65）蛋白的表达,上调IκB的含量;下调TCF7mRNA表达、下调c-MYC mRNA表达,上调c-JUN mRNA表达,提示BBM对K562/G01的增殖抑制和诱导凋亡作用可能涉及NF-κB肿瘤信号转导途径和Wnt肿瘤信号传导通路。从下调发生时间来看,NF-κB（p65）蛋白受到抑制出现在TCF7mRNA水平下降之前,提示小檗胺对K562/G01的增殖抑制作用主要是通过NF-κB途径起作用。