论文部分内容阅读
目的:探究RMP对辐照诱导的肝癌细胞凋亡和细胞内活性氧水平的影响及其作用机制。方法:1、建立裸鼠肝癌细胞皮下移植瘤模型,检测RMP对裸鼠肝癌细胞皮下移植瘤的影响,绘制裸鼠肝癌细胞生长曲线并进行HE染色。2、通过免疫组化检测裸鼠皮下移植瘤切片中RMP、增殖因子Ki67、DNA损伤因子γ-H2AX及p-p65的蛋白表达。3、通过免疫组化检测裸鼠皮下移植瘤切片中抑凋亡基因Bcl-xl的蛋白表达。4、通过活性氧试剂盒检测RMP对辐照诱导的肝癌细胞HepG2和正常肝细胞7701细胞内活性氧水平的影响。5、通过活性氧试剂盒检测不同剂量的RMP对辐照后肝癌细胞HepG2和正常肝细胞7701细胞内活性氧水平的影响。6、通过流式细胞术检测RMP对辐照诱导的肝癌细胞HepG2凋亡的影响并检测其细胞内活性氧水平。7、通过Western blot检测RMP对辐照前后肝癌细胞HepG2中氧化应激相关因子 GSS、Catalase、TrxR1、Nrf2、TrX1 蛋白表达的影响。8、通过Western blot检测不同剂量的RMP对辐照后肝癌细胞HepG2中TrX1蛋白表达的影响。结果:1、裸鼠肝癌细胞皮下移植瘤结果显示,与RMP空载体对照组相比,RMP过表达组肿瘤体积均明显增大,RMP干扰组肿瘤体积均明显减小。HE染色结果显示,辐照后,与RMP空载体对照组相比,RMP过表达组细胞密度明显增多,生长情况较好;RMP干扰组细胞密度明显减少,生长情况最差。2、免疫组化结果显示,与空载体对照组相比,未辐照与辐照组中,RMP过表达组增殖因子Ki67的蛋白表达均明显增高,RMP干扰组增殖因子Ki67的蛋白表达均明显降低。未辐照组中,RMP过表达和干扰组的DNA损伤因子γ-H2AX和p-p65的蛋白表达均无明显变化。辐照后,RMP过表达组的DNA损伤因子γ-H2AX蛋白表达明显降低,p-p65的蛋白表达明显升高;RMP干扰组的DNA损伤因子γ-H2AX蛋白表达明显升高,p-p65的蛋白表达明显降低。3、免疫组化结果显示,与空载体对照组相比,未辐照与辐照组中,RMP过表达组抑凋亡基因Bcl-xl的蛋白表达均明显增高,RMP干扰组抑凋亡基因Bcl-xl的蛋白表达均明显降低。4、活性氧试剂盒检测肝癌细胞HepG2结果显示,辐照后,与空载体对照组相比,RMP过表达组中活性氧水平明显降低,RMP干扰组中活性氧水平明显增加。随着RMP过表达质粒浓度的增加,HepG2细胞内活性氧水平随之降低;随着RMP干扰质粒浓度的增加,HepG2细胞内活性氧水平随之增加。5、活性氧试剂盒检测正常肝细胞7701结果显示,辐照后,与空载体对照组相比,RMP过表达与RMP干扰组中活性氧水平均无明显变化。随着RMP过表达质粒和干扰质粒浓度的增加,7701细胞内活性氧水平均无明显变化。6、流式细胞术结果显示,未辐照组中,与空载体对照组相比,加入活性氧抑制剂的Nac组肝癌细胞凋亡明显减少。辐照24h后,与空载体对照组相比,RMP过表达组肝癌细胞凋亡明显降低,RMP干扰组肝癌细胞凋亡明显升高,加入活性氧抑制剂的Nac组肝癌细胞凋亡明显降低。通过活性氧试剂盒检测对应的活性氧水平,结果显示,辐照后,与空载体对照组相比,RMP过表达组中活性氧水平明显降低,RMP干扰组中活性氧水平明显增加,加入活性氧抑制剂组中活性氧水平明显降低。7、Western blot结果显示,与空载体对照组相比,辐照后,RMP过表达与RMP干扰组中,GSS、Catalase、TrxR1的蛋白表达水平均无明显差异。辐照后,与空载体对照组相比,RMP过表达组中,Nrf2、TrX1的蛋白表达水平均明显增高;RMP干扰组中,Nrf2的蛋白表达水平无明显变化,TrX1的蛋白表达水平明显降低。8、Western blot结果显示,辐照后,随着RMP过表达质粒浓度的增加,肝癌细胞内TrX1的蛋白表达水平随之增加;随着RMP干扰质粒浓度的增加,肝癌细胞内TrX1的蛋白表达水平随之降低。结论:1、RMP可以促进辐照后肝癌细胞HepG2的DNA损伤修复、抑制细胞凋亡。2、RMP可以促进辐照后肝癌细胞HepG2中氧化应激因子Nrf2和TrX1的表达,降低辐照后肝癌细胞HepG2的活性氧水平,进而抑制细胞凋亡。