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目的：观察心痛舒含药血清预处理对缺氧/复氧乳鼠心肌细胞的NF-κBp65(nuclear factor-κBp65)及其活化后调控的炎症因子TNF-α、IL-1β的影响,探讨心痛舒通过抑制乳鼠心肌细胞缺氧/复氧的炎症反应途径发挥保护作用机制。方法：①乳鼠心肌细胞的原代培养及鉴定。选用出生12-24 h内的SD乳鼠,将心肌细胞培养48 h后,观察心肌细胞搏动,并采用免疫组化法检测心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)鉴定；②制备心痛舒含药血清,MTT法检测不同浓度含药血清对心肌细胞的抑制率,考察细胞毒性并根据结果选择无细胞毒性的最佳浓度作为下一步实验的工作浓度；③将培养72 h的乳鼠心肌细胞随机分4组,即正常组、缺氧复氧模型组、心脑舒通胶囊对照组、心痛舒含药血清预处理组。正常组在完全培养基中加入10%正常大鼠血清,连续常规培养24h；缺氧复氧模型组：心肌细胞缺氧1 h,复氧2 h；心脑舒通胶囊对照组：培养液中加入50 mg/L心脑舒通胶囊后予以缺氧1 h,复氧2 h；心痛舒含药血清预处理组：培养液中加入10%心痛舒含药血清后予缺氧1 h,复氧2 h。采用罗丹明B染色法观察心肌细胞形态,比色法测定MDA含量、SOD活性,ELISA法测定TNF-α、IL-1β含量,RT-PCR方法检测NF-κBp65 mRNA表达水平。结果：1、心肌细胞培养48 h后,可见细胞通过伪足细胞相互交织成网,渐形成细胞簇,同步搏动,规则、有力,细胞贴壁生长,未见细胞死亡。免疫组化鉴定结果呈强阳性,心肌细胞纯度达95%以上；2、药物血清浓度低于10%的吸光度值与细胞对照组差异无统计学意义(P>0.05)；高于15%的各浓度药液的吸光度值与细胞对照组差异有统计学意义(P<0.05)。10%浓度的含药血清抑制率为-1.08%。结果表明10%浓度为无细胞毒性的最佳浓度。3、a.罗丹明B染色观察心肌细胞形态：与正常组比较,缺氧复氧损伤后,胞体折光性下降,细胞形态极不规则,细胞变形,出现大量碎片。心脑舒通胶囊对照组心肌细胞形状较规则,细胞生长欠佳,碎片较多。心痛舒组心肌细胞形状较规则,细胞生长尚可,碎片明显较少,心肌细胞形态较缺氧/再复氧组明显改善。b.比色法测定MDA含量、SOD活性：与正常组比较,缺氧复氧模型组MDA含量显著增加,SOD活性显著降低,差异均有统计学意义(P<0.01),心脑舒通胶囊对照组、心痛舒含药血清预处理组MDA含量降低,SOD活性增加,差异无统计学意义(P>0.05)；与缺氧复氧模型组比较,心脑舒通胶囊对照组、心痛舒含药血清预处理组MDA含量降低,SOD活性升高,差异有统计学意义(P<0.01)；与心脑舒通胶囊对照组比较,心痛舒含药血清预处理组MDA含量明显降低,SOD活性明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。c. ELISA法测定TNF-α、IL-1β含量：与正常组比较,缺氧复氧模型组TNF-α、IL-1β均明显升高,差异有统计学意义(P<0.01),心脑舒通胶囊对照组、心痛舒含药血清预处理组TNF-α、IL-1β降低,差异无统计学意义(P>0.05)；与缺氧复氧模型组比较,心脑舒通胶囊对照组、心痛舒含药血清预处理组TNF-α、IL-1β明显减少,差异有统计学意义(P<0.01)；心脑舒通胶囊对照组与心痛舒含药血清预处理组TNF-α、IL-1β含量比较,结果无统计学意义(P>0.05)。d. RT-PCR方法检测NF-κBp65 mRNA表达水平：与正常组比较,缺氧复氧模型组NF-κKBp65 mRNA表达增高,差异有统计学意义(P<0.01),心脑舒通胶囊对照组、心痛舒含药血清预处理组NF-κBp65 mRNA表达降低,差异无统计学意义(P>0.05)；与缺氧复氧模型组比较,心脑舒通胶囊对照组、心痛舒含药血清预处理组NF-κBp65 mRNA的表达水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)；与心脑舒通胶囊对照组比较,心痛舒含药血清预处理组NF-κBp65 mRNA表达降低,结果有统计学意义(P<0.05)。结论：心痛舒含药血清预处理可通过抑制缺氧-复氧心肌细胞炎症反应途径发挥保护作用,其机制与降低NF-κBp65 mRNA表达及TNF-α、IL-1β含量有关。