【摘 要】
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目的:获取雪旺细胞(Schwann cells,SCs)和血管内皮细胞(Vascular endothelial cells,VECs)用于原代培养,并以不同比例培养4代SCs和VECs。观察实验中培养的结果,并找到培养最佳比例,为体内构建血管化组织工程神经提供实验基础。方法:1、从大鼠坐骨神经及胸主动脉分离、培养SCs和VECs,进行免疫荧光染色鉴定。2、在培养基中以1:1、1:4、4:1、8:
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目的:获取雪旺细胞(Schwann cells,SCs)和血管内皮细胞(Vascular endothelial cells,VECs)用于原代培养,并以不同比例培养4代SCs和VECs。观察实验中培养的结果,并找到培养最佳比例,为体内构建血管化组织工程神经提供实验基础。方法:1、从大鼠坐骨神经及胸主动脉分离、培养SCs和VECs,进行免疫荧光染色鉴定。2、在培养基中以1:1、1:4、4:1、8:1、1:8的比例联合共培养SCs和VECs,根据上述比例分为对照组(即A组—SCs单独培养设为对照组)和B、C、D、E、F五个实验组。在两种细胞共培养的第1、3、5和7天,对SCs计数,绘制其生长曲线,分析细胞共培养的实验观结果。结果:1、雪旺细胞的培养结果显示:细胞培养48h后开始附着培养瓶,第3-5天增殖较快,数量增多,到第7天细胞基本处平稳阶段,可见细胞已铺满培养瓶后胰酶消化传代,用S-100β抗体免疫荧光染色鉴定为SCs,观察到细胞形态更为均匀,具有突起,大部分呈梭形,排列生长。2、血管内皮细胞的培养结果显示:VECs初为单层扁平圆形或条梭形,彼此不重叠,边界相对清晰,呈多角,后逐渐汇合、融合相互排列紧密,现铺路石样变化,培养至第5～6天细胞数量增多,基本覆盖瓶底,并用v WF和CD31免疫荧光染色证实VECs。3、雪旺细胞与血管内皮细胞直接共培养的结果观察:每日在倒置显微镜下观察,每组SCs数量随着培养时间出现不同的变化,在共培养第1天,各实验组与对照组A细胞数量无明显差异(P>0.05),从共培养的第3天到第7天,实验组B(1:l)、C(1:4)和F(1:8)细胞计数与对照组A相比有统计学差异(P<0.05),并且实验组D(4:l)、E(8:1)与对照组A的差异无统计学意义(P>0.05),但与其他实验组B、C、F相比差异较显著(P<0.05),实验组D与实验组E有统计学差异(P<0.05)。结论:1.通过本实验的步骤可获取原代雪旺细胞和血管内皮细胞,证明了本课题的可行性,为下一步共培养实验提供了具体依据。2.实验统计分析得出雪旺细胞和血管内皮细胞共培养最适比例为4:1,为组织工程神经的血管化实验提供了理论基础。
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