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目的
1．分析浙江地区汉族人线粒体DNA(mitochondriaDNA，mtDNA)NDl基因和以西方白种人为主要来源的剑桥标准序列(CambridgeReferenceSequence)之间的差异，查找NDl基因的多态性位点以及可能会导致2型糖尿病(type2diabetesmellitus，T2DM)的突变位点。
2．分析NDl基因变异与T2DM及其并发症的关系，探讨线粒体NDl基因检测对于T2DM的诊断价值。
方法
1．选择浙江籍汉族人群中确诊为T2DM的无血缘关系的住院患者216名，详细记录每例患者的资料，包括姓名，性别，年龄，发病年龄，身高、体重、家族史、并发症及其它临床症状。同时选择无高血压、高脂血症、脑血管病、糖尿病及家族史，口服葡萄糖耐量正常的健康体检者102名作为正常对照。
2．对每例患者的血样作常规生化检测并提取全血基因组DNA，然后根据设计好的两对引物扩增出PCR产物，对产物纯化后，用直接测序法进行DNA序列检测，得到完整的NDl基因。
结果
1．T2DM患者组和正常对照组与标准序列比对存在着大量的基因变异位点，具有线粒体基因组的多态性。在216例T2DM患者中发现NDl基因68个变异位点，102份正常对照中也有33个变异位点，其中22个位点既存在于T2DM患者人群，也存在于正常对照人群，经统计学分析，C4086T合并C3970T的改变在两组间的分布具有统计学上的差异，P值为0．043，其余所有位点在两组问的分布均无统计学意义，推测大部分是一些多态性改变。被很多学者认为与T2DM发生有关的G3316A突变和T3394C突变在两组中分布也无区别，同样属于基因多态性。
2．T2DM患者中出现的68个变异位点中35个位点在www．mitomap．org中已有报道，对基因变异后编码的氨基酸分析发现，45个为同义突变，23个为错义突变，其中21个同义突变和12个错义突变在以前的文献中未曾报道。分析这些错义突变在不同物种之间的保守性表明：A3397G，A3721G，A3734G，C3571T，G3736A，T3394C，T3398C，T3644C8个变异位于线粒体基因组NDl蛋白编码区高度保守的区域内，但是其它的错义突变，都不是进化上保守的位点。23个错义突变中，有¨个突变发生了氨基酸极性的转换。
3．对发生基因变异的有家族史和无家族史的T2DM患者比较，A3523G，C4086T伴随C3970T，G342lA，T3552A，T3398C这些位点的改变在有糖尿病家族史的患者中出现。有家族史组的平均发病年龄较无家族史组明显提前(47．6：3-11．6岁vs55．7~15．1岁，P=0．035)，平均体重指数BMI显著低于无家族史组(21．1~4．68kg／m2vs23．3~3．37kg／m2，P=0．008)，女性患者远远高于无家族史组，差异有统计学意义(P<0．05)；而两组的主要生化指标甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、空腹血糖(FBG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、餐后2小时血糖(P2BG)、糖化血红蛋白(HbAlc)等的差异均无统计学意义(P>0．05)。
4．把患者检测到的变异位点结合临床资料分析，发现A3397G，A3523G，T3396C的变异均只出现在并发有视网膜病变的T2DM患者中，并且在两组中的分布具有统计学差异，尸值为0．022。A3759G，，G342lA，G3882A，T3338C，T3396C，T3398C，T4216C等位点的变异均只出现在并发高血压的患者中，G3882A在两组中的分布具有统计学差异，P值为0．045。
5．有基因变异的并发视网膜病变的T2DM患者组比无视网膜病变组HbAlC显著增高，LDL明显升高(P<0．05)；有视网膜病变组的病程比无视网膜病变组显著延长(P<0．01)；有基因变异的并发高血压的T2DM患者组比未并发高血压的T2DM患者TC、LDL明显升高，差异有统计学意义(P<0．05)。
结论
1．线粒体NDl基因中存在大量变异，且绝大部分只是基因的多态性。
2．线粒体NDl基因的下列变异A3405G，A3523G，A3532G，A3721G，A3734G，T4216C，T3338C，T3644C等可能与浙江汉族人口中T2DM的发病有关，有待于进一步深入研究。
3．线粒体NDl基因变异位点可能与T2DM的临床表现与并发症及家族遗传特性密切相关。
4．对于T2DM患者来说，除了常规诊断指标检测以外，还需做mtDNA序列分析，尤其对NDl基因中A3405G，A3523G，A3532G，A372lG，A3734G，T4216C，T3338C，T3644C，C4086T，G342lA，T3552A，T3398C，A3759G，G3882A，A3397G，T3396C等基因变异要引起特别重视，对于了解T2DM临床特征，判断预后，早期预防并发症，减少T2DM的致残率和死亡率都具有重要意义。