【摘 要】
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本研究以本实验室保藏的、具有产西贝碱能力的平贝母内生真菌P7为实验菌株。为解决P7菌株在长期保藏过程中出现的退化现象,采用宿主复壮法对其进行了复壮研究,即在培养过程中向
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本研究以本实验室保藏的、具有产西贝碱能力的平贝母内生真菌P7为实验菌株。为解决P7菌株在长期保藏过程中出现的退化现象,采用宿主复壮法对其进行了复壮研究,即在培养过程中向培养基中加入平贝母药材,结果表明,当平贝母药材的加入量为3%时,对P7菌株的生长及西贝碱的积累均具有促进作用,且西贝碱产量可达到分离之初菌株西贝碱产量的95.2%,达到了一定的复壮效果,而当加入量超过6%以后,虽对P7菌株的生长仍具有促进作用,但西贝碱的积累却受到明显抑制。
为了得到西贝碱的高产菌株,采用传统的诱变方法对P7菌株先进行了单因素诱变,包括紫外、He-Ne激光和亚硝酸处理,在各自较优剂量范围内对其正突变率进行分析得出,对于P7菌株,紫外诱变的效果最好,亚硝酸次之,He-Ne激光较弱。并对各自的正突变菌株进一步筛选,分别得到不同诱变处理的优势菌株。再以它们作为二次出发菌株进行复合诱变处理,最终筛选得到一株高产菌株P-UH-3,其西贝碱产量为0.0881mg/L,菌丝体干重为2.80g/L,分别比原始出发菌株P7的西贝碱产量提高了89.9%,菌体干重提高了18.6%,诱变效果良好,而且P-UH-3菌株具有稳定的遗传特性。
为了进一步提高目的产物西贝碱的产量,对P-UH-3菌株的培养条件进行了优化研究。通过比较不同供试培养基中菌丝体生长和西贝碱积累情况,发现最适于菌丝体生长的固体培养基为PDA培养基,而最利于西贝碱积累的液体培养基为豆芽汁蔗糖培养基。并以豆芽汁培养基为基础对P-UH-3菌株的培养条件进行单因素和正交试验优化,结果表明,最利于西贝碱积累的发酵条件为:在豆芽汁培养基的基础上,加入葡萄糖10%,蛋白胨0.15%,培养基起始pH7.0,种龄为36h,接种量为10%,最佳培养温度26℃,培养时间为7天。与初始培养条件相比,在优化后的发酵条件下,P-UH-3菌株西贝碱的产量为0.1258mg/L,增加了42.8%,而菌丝体干重的变化不明显。
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