传染性法氏囊病是一种危害3-6周龄雏鸡的急性、高度接触性传染疾病,该病的病原传染性法氏囊病病毒(IBDV)主要攻击法氏囊中未成熟的B淋巴细胞,造成鸡严重的免疫抑制。IBDV是一种双股双节段RNA病毒,其基因组包括A、B两个节段,编码VP1～VP5五种病毒蛋白。IBDV感染会影响干扰素刺激基因(Interferon Stimulated Genes,ISGs)的表达,但目前针对IBDV与ISG之间关系的研究还较少。本课题以两个IBDV感染时上调的ISGs(IFIT5和Viperin)作为研究对象,分析了其在IBDV感染过程中的作用。IFIT5是鸡IFIT家族的唯一成员,本实验室前期的蛋白质组学数据表明,在IBDV感染的DF-1细胞中IFIT5呈上调表达,但目前该基因在Genbank中仍处于预测状态,未见有关该基因的功能报道。本研究从IBDV感染的DF-1细胞中克隆了鸡IFIT5基因,其全长为1440bp,编码480个氨基酸。生物信息学分析显示其具有IFIT家族蛋白共有的六个典型TPR结构域。进化分析显示,鸡IFIT5与火鸡IFIT5的氨基酸同源性最高,与鱼类的亲缘关系最远。应用原核表达的鸡IFIT5蛋白制备的多克隆抗体,我们证明poly(I:C)、IFN-α和IFN-β均可在基因和蛋白水平诱导鸡IFIT5表达,并证实IFIT5与Mda5之间的相互作用。另外,干扰鸡IFIT5能够抑制IFN-β的产生。为研究鸡IFIT5与IBDV感染的关系,我们对IBDV感染后鸡IFIT5的动态表达进行了分析。结果显示,IBDV感染确实能够引起鸡IFIT5在体内外上调表达,且呈IBDV感染剂量依赖性。进一步对IBDV的各编码蛋白及基因组进行过表达并检测鸡IFIT5的变化,发现引起鸡IFIT5上调的病毒因子是病毒蛋白VP1和病毒基因组dsRNA。然而,无论过表达还是干扰鸡IFIT5,IBDV的病毒蛋白及病毒滴度均无明显变化,说明鸡IFIT5没有影响IBDV的复制,同时也提示IBDV可能以某种机制逃逸了 IFIT5的抗病毒作用。作为另一个具有抗病毒活性的ISG,Viperin在IBDV感染后也会被刺激上调。在此我们也对Viperin进行了过表达,并分析其对IBDV复制的影响。与IFIT5相似,鸡Viperin并不影响IBDV在DF-1细胞中复制,但人Viperin却能显著抑制IBDV在293T细胞的复制。进一步究其原因,我们发现Viperin对细胞自噬水平无影响,但可以增强293T细胞的凋亡,因此推测Viperin可能是通过诱导凋亡来限制IBDV在293T细胞复制。除先天免疫外,细胞自噬也是机体对抗病毒感染的一条途径,但长期的协同进化使病毒具有了对抗自噬的能力。在此,我们分析了 IBDV病毒蛋白VP4与自噬的关系,结果发现VP4可分布于自噬泡周围,但与自噬泡标志物LC3不存在互作。过表达VP4能够促进LC3由I型向II型转换,并导致P62累积,说明自噬被VP4所抑制。进一步我们证明VP4可以与自噬相关蛋白Beclin-1共定位并互作,提示VP4可能通过Beclin-1阻断了自噬泡与溶酶体的融合或自噬泡在溶酶体中的降解。此外,我们还发现缺失C-末端两个氨基酸的VP4具有诱导细胞凋亡的能力,这与其蛋白酶活性密切相关。