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目的: 耐甲氧诬林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)是医院内相关感染的主要病原体,特别在重症监护病房。本研究对神经外科病区暴发感染的MRSA进行表型及分子分型,了解暴发菌株的耐药及毒力特征,分析菌株同源性及进化来源,结合流行病学资料,追踪传染源及可能的传播途径,从而指导感染的控制及监测。 方法: 收集神经外科病区暴发感染患者自痰标本分离的12株MRSA及环境分离的8株MRSA,分别采用以下方法进行分析: (1)MIC法检测菌株对15种常用抗菌药物的敏感性。 (2)采用PCR检测多种毒力基因及毒力调节基因,包括葡萄球菌肠毒素基因(seb、sec)、中毒性休克综合征毒素1基因(tst-1、表皮剥脱毒素基因(eta、etb)、杀白细胞素基因(pvl)、α溶血素基因(hla)、酚可溶性调节肽α基因(psmα)、RNAⅢ、表皮细胞分化抑制剂(edin-c)。 (3)采用葡萄球菌染色体mec(SCCmec)分型、脉冲场凝胶电泳(PFGE)及多位点序列分型(MLST)对暴发感染菌株进行分子分型。 (4)按照发病时间筛选20株菌中的6株进行全基因组测序(WGS),与参考基因组TW20进行比对,对核心基因组的SNP绘制进化树,分析菌株进化来源及其携带的耐药及毒力基因,追踪可能的传染源及传播途径。 结果: (1)药物敏感试验显示所有菌株对利奈唑烷、替加环素、奎奴普丁/达福普汀、万古霉素敏感,20株MRSA中18株耐药谱完全一致。 (2)毒力基因检测显示所有菌株均表达hla、psmα、RNAⅢ基因,其余7种毒力基因未检出。 (3)mecA基因均为阳性。SCCmec分型显示所有菌株均为SCCmecⅢ型。PFGE分型结果提示20株MRSA中18株菌的同源系数为100%,余下2株分别为81.1%和85.7%。MLST分型显示所有菌株均为ST239型。 (4)通过全基因组测序产生SNPs,绘制系统发育树显示6株菌中的5株紧密地聚集在一起,亲缘关系较近,而SA13002与其它5株相距较远。比较标准药物敏感试验结果与WGS产生的耐药谱,发现两者基本相符。同时对部分毒力基因进行了分析,成功绘制了毒力谱。 结论: 此次暴发感染的菌株均为多重耐药MRSA,且与亚洲地区医院感染的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(HA-MRSA)常见分型一致,即SCCmecⅢ、ST239型。PFGE提示除了SA13002外其余19株暴发菌株可能系同一克隆株感染所致。WGS也成功地将暴发菌株与非暴发菌株区分开来,并且在基因水平上绘制了毒力谱及耐药谱,耐药基因型与表型基本相符。通过切断传播途径及更换敏感抗生素万古霉素等手段,成功控制了此次暴发,为医院MRSA的监测及控制提供了指导。