转染MiRNA27a模拟物及抑制物对卵巢细胞系的顺铂耐药性的研究

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目的:探讨采用脂质体2000 (lipofectamin2000)转染miRNA27a (microRNA miRNA)模拟物(mimics)及抑制物(inhabitors)对卵巢癌细胞系的顺铂(DDP)耐药性的研究。方法:本试验采用了小剂量DDP间歇诱导卵巢癌细胞系skov3建立卵巢癌顺铂耐药细胞系skov3/DDP:1.MTT检测细胞耐药系数;2.实时荧光定量PCR (Real-time PCR RT-PCR)检测skov3/DDP及skov3中miRNA27a的表达情况;2lipofectamin2000转染miRNA27a inhabitors、mimics,并用荧光显微镜检测转染效;3.MTT检测细胞增殖情况;4.实时荧光定量PCR检测多耐药基因(Multdrug Resistance Gene MDR1)基因的表达情况;5.流式细胞术检测细胞凋亡;6Western blot检测糖(P-gp)蛋白表达情况。结果:1skov3/DDP相对于skov3耐药系数为5.08;2miRNA27a在skov3/DDP中的表达明显高于skov3,约为2.80倍,有统计学意义;3skov3/DDP与其转染miRNA27a inhabitors, skov3及其转染mimics相比,MDR1的表达无统计学意义;4.转染抑制物的skov3/DDP的P-gp蛋白的表达较skov3/DDP降低了32.90%,转染mimics的skov3的P-gp蛋白的表达较skov3升高了20.71%;5.转染inhibitors及阴性对照(Negative Control NC)的Skov3/DDP在顺铂作用下存活率不同,有统计学意义;6.转染inhibitors的skov3/DDP与转染NC的skov3/DDP相比,前者凋亡率为10.37±2.58%,后者凋亡率为3.12±1.34%,有统计学意义。结论:上皮性卵巢癌耐药可能与miRNA27a的表达上调有关;miRNA27a可能是通过抑制MDR1基因的翻译来发挥作用而不通过抑制MDR1的转录发挥作用的;下调miRNA27a可以逆转卵巢癌细胞系的耐药性,增加其对顺铂的敏感性。
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