【摘 要】
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目的探究分析miR-143-3p在阿尔茨海默症(Alzheimer’s disease,AD)细胞模型中神经细胞存活方面的效应。方法(1)首先用全反式维甲酸(Retinoic acid,RA)诱导SH-SY5Y细胞向神经
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目的探究分析miR-143-3p在阿尔茨海默症(Alzheimer’s disease,AD)细胞模型中神经细胞存活方面的效应。方法(1)首先用全反式维甲酸(Retinoic acid,RA)诱导SH-SY5Y细胞向神经元分化,普通光学显微镜观察细胞形态,采用免疫荧光方法检测微管蛋白βIII表达;(2)用Aβ1-42诱导分化后的SH-SY5Y细胞建立AD细胞模型,采用细胞计数试剂盒CCK-8的方法检测细胞活力,TUNEL法检测神经细胞死亡,采用定量PCR检测miR-143-3p的表达,Western Blot检测NRG1蛋白表达;(3)在SH-SY5Y细胞系中转染miR-143-3p抑制剂(inhibitor),并用Aβ1-42处理SH-SY5Y细胞,采用定量PCR和Western Blot方法检测miR-143-3p、NGR1及相关凋亡蛋白的m RNA及蛋白表达,CCK-8的方法检测细胞活力,TUNEL法检测神经细胞死亡;(4)通过荧光素酶报告基因方法检测miR-143-3p与NRG1相互作用;在SH-SY5Y细胞系中转染miR-143-3p抑制剂/类似物(inhibitor/mimic),定量PCR和Western Blot检测SH-SY5Y细胞中NRG1的表达;(5)在SH-SY5Y细胞系中共转染miR-143-3p inhibitor和NRG1的si RNA,并用Aβ1-42处理SH-SY5Y细胞,CCK-8的方法检测细胞活力,TUNEL法检测神经细胞死亡。结果(1)RA诱导的SH-SY5Y细胞可见典型的神经元样突触,且免疫荧光检测显示微管蛋白βIII表达水平增加;(2)Aβ1-42处理SH-SY5Y细胞可构建AD细胞模型,与control组细胞比较,AD细胞模型中miR-143-3p呈明显高表达(P<0.01),NRG1呈明显低表达(P<0.001);与control组相比,AD细胞模型中神经细胞凋亡比例明显增加(P<0.001),细胞存活率则明显降低(P<0.001);(3)靶向抑制miR-143-3p表达后,Aβ1-42诱导的细胞凋亡比例明显降低(P<0.01),NRG1蛋白表达水平则明显升高(P<0.01),且裂解酶Caspase3及Caspase9蛋白表达水平明显降低(P<0.001);(4)双荧光素酶基因检测报告显示miR-143-3p与NRG1存在靶向结合位点,NGR1是miR-143-3p的下游靶基因;(5)靶向沉默NGR1表达可逆转miR-143-3p抑制AD细胞活力(P<0.01)及促进凋亡的效应(P<0.001)。结论1、miR-143-3p在AD模型中高表达;NRG1在AD模型中低表达。2、NRG1是miR-143-3p的靶基因,miR-143-3p是通过靶基因NRG1抑制AD模型中神经细胞存活。
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