研究目的:高尿酸血症（Hyperuricemia）是指嘌呤代谢紊乱,尿酸在体内堆积所导致的慢性代谢疾病,寻找有效的治疗靶点以及治疗方法是当前研究的热点。尿酸盐转运蛋白ABC转运蛋白2（ATP-binding cassette subfamily G member 2,ABCG2）主要表达于肾脏,促进尿酸排泄。本研究通过体外合成ABCG2 mRNA,将其转染至高尿酸血症模型小鼠体内,观察对小鼠尿酸的影响及其相关作用。研究方法:1.从NCBI中查得小鼠ABCG2基因序列,设计添加5’和3’端非翻译区（untranslated regions,UTR）。化学合成ABCG2 mRNA的DNA序列,将其插入到质粒p ET-28a（+）中,对重组质粒p ET-28a（+）-ABCG2进行Bam H I/Sal I双酶切琼脂糖凝胶电泳,检测DNA模板长度是否符合预期。再以重组质粒为模板,PCR仪扩增出3’UTR端添加120个碱基poly（T）尾的DNA序列,与未加尾序列通过琼脂糖凝胶电泳比较分子量大小,检测DNA模板加尾后长度是否符合预期,并且进行测序验证。2.六孔板中培养小鼠肾小管上皮细胞TCMK-1,DNA序列加尾后,将其作为模板,通过体外转录合成mRNA,纯化后转染不同剂量至TCMK-1细胞中,Western blot检测细胞中的蛋白质表达。3.动物实验,24只SPF级KM小鼠,随机分为正常组、模型组、苯溴马隆治疗组[20mg/（kg·d）]和mRNA治疗组[2 mg/（kg·3d）],每组6只。除正常组外其它各组利用氧嗪酸钾[200 mg/（kg·d）]灌胃,并辅以高嘌呤饮食构建高尿酸血症小鼠模型,苯溴马隆组灌胃给药,mRNA被脂质纳米颗粒（Lipid nanoparticles,LNPs）包裹后以尾静脉注射方式给药,边造模边治疗持续28天。4.观察记录小鼠体重及其生长状态,28天后检测各组小鼠血尿酸、尿尿酸、血肌酐、血尿素氮和肝脏中黄嘌呤氧化酶活性。5.剪取各组小鼠肾脏组织,苏木精-伊红（hematoxylin-eosin,HE）染色观察小鼠肾脏病理结构改变。6.实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR,q RT-PCR）检测各组小鼠肾脏组织中ABCG2 mRNA的相对表达量。Western blot、免疫组化法（Immunohistochemistry,IHC）检测各组小鼠肾脏中ABCG2蛋白表达水平。研究结果:1.琼脂糖凝胶电泳结果显示DNA分子量大小与预期一致,ABCG2基因成功插入到p ET-28a（+）质粒当中,添加poly（T）尾后的DNA序列,长度明显大于未加尾序列,其测序结果与预期一致。2.Western blot结果显示TCMK-1细胞中的ABCG2蛋白质表达量,随着mRNA转染剂量增多而升高（P<0.01）,表明转染的mRNA可以在细胞中翻译。3.动物实验结果显示,模型组小鼠的血尿酸水平和尿尿酸水平明显高于正常组（P<0.01）,表明模型组小鼠体内尿酸堆积,高尿酸血症小鼠模型成功建立。4.与模型组小鼠相比,mRNA治疗能够降低小鼠血尿酸及血尿素氮、肌酐水平（P<0.05或P<0.01）,同时升高尿尿酸水平（P<0.05）。对小鼠肝脏中黄嘌呤氧化酶活性没有明显影响。5.与模型组小鼠肾脏组织病理损伤相比,mRNA治疗组小鼠肾脏肾小管细胞水肿、炎细胞浸润等得到改善。mRNA治疗组小鼠的生长状态明显优于苯溴马隆治疗组,未发现明显毒副作用。6.q RT-PCR结果显示,mRNA组小鼠肾脏组织中ABCG2 mRNA相对表达量远高于其它各组（P<0.01）,表明脂质纳米颗粒所包裹的ABCG2 mRNA经尾静脉注射后成功到达小鼠肾脏组织。7.与模型组相比,免疫组化和Western blot结果显示mRNA治疗组小鼠肾脏组织中ABCG2蛋白质表达水平明显升高（P<0.01）,表明体外修饰合成的mRNA在小鼠肾脏组织中成功翻译出蛋白质。结论:体外修饰合成的ABCG2 mRNA经过脂质纳米颗粒包裹后,通过尾静脉注射后可以在高尿酸血症模型小鼠体内成功翻译出蛋白质,进而促进尿酸和相关的其它有机离子排泄,小鼠肾脏组织的病理损伤也得到了明显改善。研究结果为临床利用ABCG2基因作为治疗高尿酸血症及其相关疾病的靶点提供实验依据。