昭通天麻DNA条形码研究及药用成分分析

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天麻(Gastrodia elata Bl.)隶属于兰科(Orchidaceae)、兰亚科(Subfam.Orchidoideae)、树兰族(Trib. Epidendreae)、天麻亚族(Subtrib. Gastrodiinae)天麻属(Gastrodia R.Br.)腐生草本植物,无根无绿叶,与蜜环菌(Armillaria mellea(Vahl ex Fr.) Karst.)共生。天麻以块茎入药,是主产于我国的名贵中药,在我国已有两千余年的用药历史。《中国植物志》记载天麻属在我国分布有13种,昭通地区所分布的主要为天麻(G. elata Bl.)的4个变型,即红天麻(G. elata Bl. f.elata)、绿天麻(G. elata Bl. f. viridis Makino)、乌天麻(G. elata Bl. f. glaucaS.Chow)、黄天麻(G. elata Bl. f. flavida S. Chow)。本文综合应用了形态学、DNA条形码技术和化学成分分析等手段和方法对昭通天麻黄、绿、乌3个变型的分类进行了研究。此外,我们也对昭通天麻不同变型共生真菌的种类进行了探讨,主要研究结果如下:1.天麻的形态分类研究昭通天麻植物形态特征差异明显,从株高、花色、茎秆颜色以及块茎表型性状可直观对天麻3个变型——乌天麻、黄天麻、绿天麻进行形态分类。3个变型天麻块茎表型性状具有一定程度的多样性。乌天麻个体较大,与黄天麻和绿天麻差异明显,且乌天麻遗传变异稳定,可作为栽培天麻的优质种源。天麻块茎各表型性状变型间变异大于变型内变异,从这个意义上来说,变型间变异是天麻的主要变异来源;天麻药材由于经过加工炮制,3个变型之间的药材形态特征已经很接近,形态鉴别困难。2.昭通天麻的DNA条形码研究分析比较了ITS、matK、rbcL、trnH-psbA、trnL-F五个DNA条形码候选序列在天麻不同变型内和变型间的鉴别效果,并对组合片段ITS+rbcL的鉴定效果进行了评估。在天麻ITS、rbcL、matK和trnH-psbA基因中,仅ITS和rbcL得到扩增,但变型内变型间没有明显的barcoding gap,上述通用条码不适合作为昭通天麻种下变型DNA条形码的研究,但是ITS序列可作为不同居群天麻的分子鉴别研究;叶绿体基因片段rbcL和trnH-psbA的成功扩增,推测天麻叶绿体仍未退化完全。从ITS序列分析得出,黄天麻与乌天麻亲缘关系最近,其次是绿天麻与黄天麻,乌天麻与绿天麻亲缘关系最远;天麻ITS序列在变型内和变型间大部分个体变异较小,仅有少部分个体变异较大,变异主要发生在ITS1区;就变型内来说,绿天麻的遗传变异最大,乌天麻和黄天麻遗传变异较小,乌天麻和黄天麻遗传稳定,有利于天麻的遗传育种。昭通天麻与贵州大方天麻的亲缘关系较近,而与陕西汉中天麻的亲缘关系却相对较远,不同来源相同变型天麻的ITS序列差异明显,而相同来源不同变型间的ITS序列同源性较高。天麻共生菌不是单一的蜜环菌(Armillaria mellea (Vahl ex Fr.) Karst.),大部分是蜜环菌属(Armillaria spp.)的其他种,各蜜环菌种与各变型天麻的共生并非一一对应关系。天麻共生菌可能还含有小菇属(Mycena)真菌,但是未发现有小菇属真菌紫萁小菇(Myeena osmundieola Lange)存在。3.昭通天麻药用成分研究经HPLC检测,各变型天麻天麻素含量:干品乌天麻>鲜品红天麻>鲜品黄天麻>鲜品绿天麻>鲜品乌天麻;对羟基苯甲醇含量:鲜品绿天麻>鲜品红天麻>鲜品黄天麻>鲜品乌天麻>干品乌天麻;腺苷含量:鲜品红天麻>干品乌天麻>鲜品黄天麻>鲜品乌天麻>鲜品绿天麻;对羟基苯甲醛含量:干品乌天麻>鲜品乌天麻>鲜品绿天麻>鲜品黄天麻>鲜品红天麻。鲜品天麻的天麻素含量均低于干品天麻,药用天麻以炮制加工后的成品麻为佳。不同变型天麻中天麻素、对羟基苯甲醇、腺苷和对羟基苯甲醛含量均有一定差异,但暂未发现其变化的规律性。
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