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目的脑出血(Intracerebral hemorrhage,ICH)是一种急性危重脑血管疾病,具有高致死致残率等特点。大量的研究证据表明继发性脑损伤(secondary brain injury,SBI)是脑出血预后不良的主要病理因素之一。最近研究显示,核受体过氧化物酶体增殖物激活受体 β/δ(Peroxisome proliferator activated receptor,PPARβ/δ)在中枢神经损伤的病理生理过程中起着重要作用。本研究旨在初步探讨激活PPARβ/δ对ICH小鼠模型SBI的保护作用及其机制。方法1.小鼠ICH模型建立与评估:选取健康雄性C57BL/6小鼠,将其随机分为假手术组(Sham组)、对照组(Vehicle组)、GW0742组。采用右侧尾状壳核注射Ⅳ型胶原酶建立ICH小鼠模型,并运用Bederson评分确认造模成功。造模成功后予以腹腔注射GW0742或等量生理盐水。各组小鼠于术后行疲劳转棒实验、前肢放置实验、转角实验评估激活PPARβ/δ对ICH诱导神经功能损害的保护作用,并根据结果确定后续研究时间点。2.术后处死小鼠,运用干湿重法检测各组脑水肿的变化,通过伊文思兰(Evans Blue,EB)及异硫氰酸荧光素葡聚糖(fluorescein isothiocyanate-dextran,FITC-dextran)渗透率检测血脑屏障(blood brain barrier,BBB)通透性变化情况。并利用脑组织冠状切片计算ICH血肿体积的变化。3.神经元损伤检测:原位末端标记法(Terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling,TUNEL)和神经元核蛋白 NeuN(Neuronal nuclear protein,NeuN)荧光双标染色检测血肿周围神经元凋亡;尼氏染色(Nissl staining)评估血肿周围神经元存活情况。4.运用免疫组织化学染色和蛋白印迹(Western Blot,WB)方法检测小鼠脑血肿周围组织PPARβ/δ蛋白表达水平的变化。并采用免疫荧光双标染色观察PPARβ/δ在脑组织不同类型细胞中的表达情况。5.Western Blot对血肿周围组织中炎症相关蛋白白细胞介素(Interleukin,IL)-1β、肿瘤坏死因(Tumor necrosis factor,TNF)-α以及凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤(B-cell lymphoma,Bcl)-2和Bcl-2相关X(Bcl-2-relatedX,Bax)蛋白的表达水平进行检测。6.采用免疫组织化学染色对血肿周围组织中炎症相关蛋白IL-1β、TNF-α以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达水平进行检测。7.采用Western Blot检测血肿周围组织中离子钙结合蛋白(ionized calcium-binding adapter molecular-1,Iba1)和胶质纤维酸性蛋白(glialfibrillary acidic protein,GFAP)的蛋白表达水平来评估胶质细胞增生情况。结果1.ICH造模后小鼠出现左侧肢体瘫痪,伴自发左转活动,且行动较迟缓。行为学评分显示ICH小鼠神经功能障碍明显重于Sham组小鼠。利用GW0742干预可以改善ICH小鼠1d的神经功能评分,但与Vehicle组相比,结果无统计学差异(P>0.05)。与Vehicle组相比,GW0742可改善ICH 3d神经功能评分,结果有显著统计学差异(P<0.05),从而确认ICH 3d为后续研究时间点。2.ICH小鼠BBB通透性明显升高,并且脑含水量明显增加。与Vehicle组相比,GW0742干预可显著降低EB、FITC-dextran渗透率,同时减轻脑含水量(P<0.05)。GW0742可以降低ICH小鼠脑内血肿体积,但与Vehicle组相比,结果无统计学差异(P>0.05)。3.TUNEL与NeuN荧光双标染色显示小鼠ICH后血肿周围组织中凋亡神经元数量明显增加。与Vehicle组相比,GW0742干预可以明显减少凋亡神经元数量(P<0.05)。尼氏染色显示ICH血肿周围存活神经元数量明显降低,并且伴有尼氏小体大量减少。与Vehicle组相比,GW0742可以显著增加血肿周围存活神经元及尼氏小体的数量,结果有统计学差异(P<0.05)。4.免疫组织化学染色和Western Blot结果显示ICH血肿周围组织中PPARβ/δ蛋白表达水平明显升高,主要表达于神经细胞胞浆内,细胞核内也有少量表达。与Vehicle组相比,GW0742干预可以上调小鼠脑内PPARβ/δ蛋白表达水平(P<0.05)。免疫荧光双标染色结果显示PPARβ/δ表达于神经元,而非小胶质细胞或星形胶质细胞。5.免疫组织化学染色和Western Blot结果显示ICH血肿周围组织中抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平明显降低,而促炎细胞因子IL-1β、TNF-α和促凋亡蛋白Bax的表达水平明显升高。与Vehicle组相比,GW0742干预可升高Bcl-2并降低IL-1β、TNF-α和Bax的蛋白表达水平(P<0.05)。6.Western Blot结果显示ICH血肿周围组织中Ibal、GFAP蛋白表达水平明显升高。与Vehicle组相比,GW0742干预可降低Iba1、GFAP蛋白表达水平,结果有统计学差异(P<0.05)。结论1.GW0742激活PPARβ/δ可以缓解ICH小鼠神经功能损伤,改善BBB通透性的改变,减轻脑水肿;2.GW0742激活PPARβ/δ可减轻ICH后神经元损伤并抑制胶质细胞增生,参与ICH后SBI的病理过程;3.GW0742激活PPARβ/δ对ICH引起的SBI具有神经保护作用,可能通过抗炎和抗凋亡途径来实现。