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第一部分:回顾性分析儿童急性外源性类脂性肺炎的临床特征目的:急性外源性类脂性肺炎(Acute Exogenous lipoid pneumonia,AELP)是一种少见的非感染性肺实质和间质疾病,由于误吸或吸入了动物、植物、或矿物油类而致。但目前以散发病例多见,缺乏规范的诊疗标准。第一部分研究主要回顾性分析总结AELP的临床特征并探讨诊疗方案。方法:比较21 例AELP患儿(AELP组)与25例社区获得性肺炎(Community-acquired pneumonia,CAP组)的临床特点、实验室指标(白细胞计数、C反应蛋白、血气分析)及影像学改变等资料。结 果:1.AELP组平均年龄30.19±14.176 m;CAP组平均年龄25.24±25.325 m,两组发病平均年龄比较无统计学差异(t=0.796,P>0.05 P=0.43);AELP组首诊时间40.762±54.361h,CAP 组 150.72±88.323h,两组比较有统计学差异(t=-4.965,P<0.01 P=0.000);AELP组平均住院时间11.47± 10.033d,CAP组平均住院时间5.04±1.881d,两组住院时间比较有统计学差异(t=3.149,P<0.01,P=0.003)。2.AELP组入院时血常规白细胞计数16.016±3.632×109/L,CAP组白细胞计数10.078±4.015×109/L,两组比较有统计学差异(t=5.217,P<0.01,P=0.000),AELP组入院时 CRP 35.624±39.626 mg/L,CAP 组入院时 CRP19.197±24.218 mg/L,两组比较无统计学差异(t=1.726,P>0.05,P=0.09)。AELP组入院时血气分析P02 83.905±13.172 mmHg,CAP组入院时P02 95.28±22.731 mmHg,两组比较有统计学差异(t=-2.023 P<0.05,P=0.049)。3.AELP组影像学检查最早发现病变在吸入后3小时,首次影像学检查40.90±53.35h;一侧肺部异常仅4例,双侧肺部改变17例,主要在中下叶,出现磨玻璃样改变(3/21),粟粒样变化(2/21),显示肺叶或节段性病变15例(15/21),肺间质增厚(2/21)和空腔(1/21),纵隔积气(1/21)。所有病例均有复查影像学,其中胸片复查16例,复查胸部CT 5例,肺部渗出持续时间8d～5.5m。CAP组首次肺部影像学的拍摄时间在病程第3～20d,平均平均6.52±3.87d,本组病例中行胸片检查21例,胸部CT检查4例;一侧肺部病变12例,双侧肺部改变13例,主要在中下叶。复查影像学16例,复查时间在入院后5～10天,其中胸片复查15例,复查胸部CT1例。4.AELP组所有病例均使用了抗生素及糖皮质激素治疗,其中给予10mg/kg.d治疗3d后改1～2mg/kg,次q12h治疗4例;1～2mg/kg,次q8h治疗3例,1～2mg/kg,次q12h治疗14例,常规剂量治疗3-5d后改为1～2mg/kg,次qd,3天后甲泼尼龙片口服;CAP组使用抗生素1 1例,6例使用甲泼尼龙针1～2mg/kg,次q12h治疗3～5d。结 论:1.意外误服的病例容易被忽视,一旦出现呛咳和或呕吐可导致AELP,其矿物油接触史以及肺部影像学的典型改变有助于诊断。2.胸部CT检查有助早期诊断,影像学检查可在吸入后6小时左右,AELP在影像学的改变早于CAP,吸收时间却迟于CAP。3.糖皮质激素及抗生素的使用在AELP比CAP更普遍。AELP行早期激素治疗,有利于控制病情、改善预后。第二部分:大鼠幼鼠急性外源性类脂性肺炎模型的建立及肺组织的损伤目的:探讨AELP模型的建立及油脂吸入对大鼠幼鼠肺组织的损伤情况。方法:选择无创性经口气管插管滴入油脂的方法,建立本实验最适合的大鼠幼鼠AELP模型。雄性SD大鼠幼鼠24只,SPF级别,日龄25～30天,体重180～220g随机分为对照组(NS组)12只,模型组(AELP组)12只。结果:通过无创性经口气管插管滴入油脂,两肺存在渗出性改变,AELP组肺部渗出较NS组明显,建模后72小时复查胸片,NS组基本吸收,AELP组仍有渗出。AELP组肺组织病理观察见肺间质内大量炎性细胞及红细胞浸润,见中性粒细胞大量浸润或聚集在血管壁或肺泡间隙、肺泡间隔明显增宽,肺泡腔内可见红细胞漏出。苏丹Ⅲ染色光学显微镜下看到被染成橘红色的小粒及吞噬橘红色小粒的巨噬细胞。结论:缝纫机油可用于实验操作,无创直视气管插管滴入油脂的方法可很好的模拟外源性油脂吸入的过程,适合AELP模型复制。0.5ml/kg的油脂吸入量能确保造模的成功率,减少死亡率。比较两组肺组织病理改变,表明油脂吸入造成肺组织的损伤,吸入后3-5d肺组织损伤明显。第三部分:地塞米松对大鼠幼鼠急性外源性类脂性肺炎的保护作用及机制研究目的:给予地塞米松(Dexamethasone,DXM)及二硫代氨基甲酸批咯烷(Pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)干预,探讨糖皮质激素对大鼠幼鼠AELP肺组织的保护作用及相关机制,为AELP临床诊治提供依据。方法:取雄性SD大鼠幼鼠100只,SPF级别,日龄25～30天,体重180～220g,随机分成5组,每组20只,空白对照组(A组,吸入生理盐水0.5ml/kg);模型组(B组,吸入缝纫机油0.5ml/kg+腹腔注射NS);PDTC治疗组(C组,建模+腹腔注射PDTC);DXM治疗组(D组,建模+腹腔注射DXM);PDTC+DXM治疗组(E组,建模+腹腔联合治疗注射)。各组分别在建模后1d、3d、5d、7d取5只麻醉处死采集血清、BALF、肺组织标本等,比较外源性类脂性肺炎大鼠幼鼠在不同时段的一般情况变化;评价肺组织的损伤:HE染色观察肺组织形态、湿/干重比;检测支气管肺泡灌洗液及血清KL-6、IL-6、TNF-α、MIF浓度的动态;免疫组化及Western blot法检测肺组织NF-κB p65、IKKα、Bcl-2 的表达。结果:1.油脂吸入后出现典型的肺损伤改变。建模后第1-7d油脂吸入各组肺损伤评分较A组升高,差异有统计学意义(P<0.05);第1d、3d、5d、7dC、E组与B组比较肺损伤评分下降,差异有统计学意义(P<0.05),D组与B组比较第3d、5d、7d肺损伤评分下降,差异有统计学意义(P<0.05)。2.BALF、血清B组TNF-α与A组比较,4个时间点均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);D、E组与B组比较4个时间点均下降,差异有统计学意义(P<0.05);C组BALF中TNF-α与B组比较在1d,3d,5d下降,在血清3d,5d,7d较B组下降,差异有统计学意义(P<0.05);BALF中D、E组TNF-α与C比较均下降,差异有统计学意义(P<0.05)。在BALF、血清中B组IL-6与A组比较4个时间点均升高,差异存在统计学意义(P<0.05);BALF中C组在1d,3d与B组比较下降,D组第3d较B组下降,差异有统计学意义(P<0.05),E组较B组4个时间点明显下降,差异有统计学意义(P<0.01);在血清,C、D、E组较B组4个时间点下降,差异有统计学意义(P<0.05)。BALF中B组MIF与A组比较4个时间点均升高,差异存在统计学意义(P<0.05);B组与A组(血清)比较3d,5d升高明显,差异有统计学意义(P<0.05);治疗组D、E与B组(BALF、血清)比较4个时间点均下降,差异存在统计学意义(P<0.05);C组(BALF)与B组在1d,3d下降,差异有统计学意义(P<0.05);C组(血清)与B组比较在3d,5d,7d下降,差异有统计学意义(P<0.05)。3.各组KL-6变化:B组表达明显升高,其中第3d最高;A组BALF中KL-6在第1d最高,血清中第3d最高;C组在第1-5d表达低于D组,第7d稍上升;E组表达持续在较低水平。B组与A组比较(BALF、血清)4个时间点均升高,差异存在统计学意义(P<0.05);C、D、E组与B组(BALF、血清)比较,4个时间点均下降,差异存在统计学意义(P<0.05)。4.血清、BALF中TNF-α水平与IL-6水平呈直线相关趋势,且呈高度正相关(r=0.901,r=0.754,P<0.05),血清、BALF中TNF-α水平与MIF水平呈直线相关趋势(r=0.778,r=0.789,P<0.05),血清、BALF中IL-6与与MIF水平呈直线相关趋势(r=0.811,r=0.793P<0.05)说明IL-6、TNF-α、MIF参与油脂对肺组织的损伤。血清、BALF中KL-6与TNF-α水平呈直线相关趋势,且呈高度正相关(r=0.849,r=0.776,P<0.05),血清、BALF中KL-6与IL-6水平呈直线相关趋势,且呈高度正相关(r=0.790,r=0.754,P<0.05),血清、BALF中KL-6与MIF水平呈直线相关趋势,且呈高度正相关(1=0.778,r=0.806,P<0.05)。5.大鼠幼鼠肺组织B组NF-κB P65的表达4个时间点与A组比较有明显升高(P<0.01),C、D、E组给予药物干预后,NF-KB P65蛋白表达受到抑制,C、D、E组第7d最低。C、D、E组NF-κB P65蛋白表达在4个点明显低于B组,差异有统计学意义(P<0.05),D、E组NF-κB P65蛋白表达与C组比较在3d、5d、7d降低,差异有统计学意义(P<0.05)。6.大鼠幼鼠B组肺组织IKKα的表达4个时间点较A组有明显升高(P<0.01);C、D、E组给予药物干预后IKKα蛋白表达受到抑制,C、D、E组第7d最低。C、D、E组IKKα蛋白表达与B组比较在5d、7d降低,差异有统计学意义(P<0.05),E组IKKα蛋白表达较C组在3d、5d明显下降,差异有统计学意义(P<0.05),C、D组之间无统计学差异(P>0.05)。7.大鼠幼鼠B组肺组织Bcl-2的表达在5d、7d较A组比较低下(P<0.05),第5d最低;C、D、E组第5-7d表达较高;C、D组Bcl-2蛋白表达与B组比较在4个时间点均升高,差异有统计学意义(P<0.05),E组Bcl-2蛋白表达较B组在3d、5d、7d时间点升高,差异有统计学意义(P<0.05),D、E组Bcl-2蛋白表达较C组在5d、7d有升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1.油脂吸入后大鼠幼鼠BALF及血清IL-6、TNF-a、MIF表达增多,导致肺组织的炎性损伤,各炎症因子之间及炎症因子与KL-6呈高度正相关,KL-6的浓度变化结合炎症因子的动态水平可以反映肺损伤的严重程度。2.大鼠幼鼠油脂吸入性损伤后肺组织内NF-κB p65表达与相关炎症因子活化时相一致,表明NF-κB通路活化后通过调节炎症因子的表达参与了油脂吸入肺损伤早期肺组织的病理改变。IKKα在肺损伤后表达与NF-κB p65的活化时相一致,说明IKKα参与NF-κB信号通路。3.DXM通过下调炎症因子的水平,减轻油脂吸入对肺组织的损伤,从而改善肺功能。4.DXM通过下调肺组织NF-κB p65、IKKα表达,抑制NF-κB信号通路;同时具有上调Bcl-2的表达,抑制细胞凋亡,减轻油脂对大鼠幼鼠肺组织的损伤。