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目的p66Shc是线粒体途径ROS产生的重要调节因子,对抑制心肌氧化应激损伤有着重要的保护作用。但作为一个胞内蛋白,目前尚缺乏有效的分子配体可以特异性的抑制p66Shc,从而达到治疗目的。本研究首先利用生物信息学方法筛选出作用于p66Shc蛋白的miRNA,并进一步探索该miRNA通过抑制p66shc在心肌氧化应激损伤中的治疗作用。方法首先通过生物信息学方法使用软件TargetScanMouse和microma.org以p66Shc为靶点,筛选出所有可能对其作用的miRNA,之后通过实验学方法使用qRT-PCR方法验证在阿霉素处理模拟致心肌氧化应激损伤的小鼠模型中初筛miRNA的表达量变化,再使用荧光素酶报告基因方法确定筛选出的目的miRNA与p66Shc蛋白之间存在直接作用。在体外培养原代心肌细胞中,利用miRNA mimic转染过表达miRNA,观察其对阿霉素处理后心肌相化应激损伤的保护作用,并通过western blot方法检测上述miRNA对p66Shc通路相关蛋白的影响,并用比色法等检测相关氧化应激指标变化。结果1、目的 miRNA 为 miR-124通过生物信息学方法及相关筛选条件后得出miR-9、miR-124、miR-204可能作为分子配体有效干预p66Shc的表达,其mirSVR score、PhastCons score、Pct分别为-0.5235/-0.7940/-0.6301、0.5809/0.5444/0.5637、0.98/0.92/0.46。在阿霉素腹腔注射模拟小鼠氧化应激模型中仅miR-124表达稳定减少的,并通过荧光素酶报告基因方法确认miR-124与p66Shc之间存在直接作用(P<0.05)。2、miR-124抑制p66Shc蛋白表达阿霉素处理原代心肌小鼠心肌细胞后,细胞内p66Shc蛋白表达增加,并与阿霉素处理浓度及处理时间存在相关性,在浓度为5umol/L及处理时间为24小时时存在统计学差异(P<0.05)。阿霉素处理后细胞内氧化应激水平明显升高,主要表现为ROS、MDA量及细胞凋亡增加,总SOD活性降低(P<0.05)。过表达miR-124后,心肌细胞中p66Shc表达下降;此外,在过表达组心肌细胞中,用阿霉素处理后p66Shc表达量较对照组明显减少(P<0.05),pSer36-p66Shc表达量相对增多。miR-124过表达后,阿霉素处理心肌细胞,其氧化应激水平较对照组明显降低(P<0.05)。结论miR-124对阿霉素处理导致的心肌氧化应激损伤存在保护作用,其主要是通过减少p66Shc表达发挥作用。