人类的分娩发动是一个多因素作用、多阶段变化、多分子参与的过程。多分子中包括多种基因及其通道和活性蛋白。目前对这些基因及其通道和活性蛋白的研究大多集中在单个或少数几个相关基因及其蛋白产物上，难以反映分娩发动时子宫平滑肌蛋白质改变的全貌。而且研究对象大多局限于实验动物或人类的子宫下段组织，无法代替分娩发动时承担主动收缩的子宫体部的分子改变情况。尽管也有采用一些新技术如比较基因组杂交、微阵列等从mRNA整体水平进行研究，但由于mRNA的改变仍不能完全反映子宫平滑肌组织内蛋白质的变化情况，并且蛋白质还存在翻译后修饰、转移定位、构象变化以及蛋白质与蛋白质或其他分子之间相互作用等一系列自身特有问题。因此若能直接从蛋白质整体水平入手来研究人类子宫平滑肌的分娩发动相关蛋白及其功能，并与子宫平滑肌中mRNA的改变情况相互印证，将更真实和全面地揭示人类分娩发动时子宫平滑肌的变化本质。第一章人子宫平滑肌分娩发动相关蛋白质的分离和鉴定目的：探讨人类分娩时，临产前后及不同部位的子宫平滑肌组织差异蛋白表达谱的变化，筛选出分娩发动相关的差异表达蛋白。方法：12例健康孕妇(分为未临产组、自然临产组，每组6例)，剖宫产术中活检子宫体部和子宫下段平滑肌组织，采用一步抽提法制备临产前后的人足月妊娠子宫体部和子宫下段平滑肌总蛋白质，应用双向凝胶电泳技术建立了临产前后子宫平滑肌双向凝胶电泳图谱。ImageMaster 2D Platinum图像分析软件分别对临产前后的同一子宫部位的两组总蛋白质的双向电泳图谱进行了分析比较，以比值大于2或小于-2的蛋白质斑点作为显著性差异表达的蛋白质筛选标准。随机选择的20个临产前后子宫体部差异表达的蛋白质斑点和4个子宫下段差异蛋白质斑点采用肽质量指纹(PMF)质谱技术进行鉴定。应用生物信息学技术，结合SWISS-PROT和NCBI数据库中蛋白质的有关信息，对所鉴定的24个蛋白质进行了功能的初步分析。结果：1临产前后子宫体部和子宫下段平滑肌双向凝胶电泳图谱的建立建立了分辨率高，重复性好的临产前后子宫体部和子宫下段双向凝胶电泳(2-DE)图谱。检测到临产前后子宫体部组织总蛋白质点数分别为622±14和654±34，两张2-DE图谱上蛋白质斑点的相关性达到90.6％；临产前后子宫下段组织总蛋白质斑点分别为432±14和441±24，两张2-DE图谱上蛋白质斑点的相关性达到87.2％。2临产前后子宫平滑肌差异蛋白鉴定结果随机选择的24个子宫平滑肌差异表达的蛋白质斑点全部成功得到鉴定。按其功能主要可以分为6类：①细胞结构相关蛋白质；②钙结合蛋白质；③分子伴侣；④能量与代谢相关酶类；⑤抗氧化酶类；⑥信号传导相关蛋白质。3临产前后子宫平滑肌的HSP27的表达比较人类子宫体部和子宫下段平滑肌2-DE图谱均发现多个分子量相等，等电点不同的HSP27蛋白斑点，其中子宫体部1个HSP27斑点有差异性，余无差异。结论：1首次采用双向凝胶电泳技术耦联肽质量指纹质谱技术，结合生物信息数据库，筛选出20个子宫体部平滑肌分娩发动相关蛋白，填补了这一研究领域的空白。2筛选出的差异蛋白分为多种，且在不同子宫部位既有共同的差异表达蛋白(Calponin-1，Transgelin)，亦有不同的差异表达蛋白，提示分娩发动是多个蛋白参与，功能相互协调的过程。3临产状态同一蛋白分子在不同子宫部位差异表达的亚型不同(Annexin)，提示子宫体部和子宫下段分娩发动时信号传导通路可能具不同的调控机制。4发现Vimentin蛋白在未临产人子宫体部平滑肌高表达，为临床早产宫缩抑制剂的研发提供一个候选靶标。5发现临产后人子宫体部平滑肌Transgelin表达上调，提示Transgelin可能通过信号传导通路参与分娩发动。6发现临产后人子宫体部平滑肌HSP27表达上调，提示HSP27可能在分娩发动中兼有收缩调节蛋白和分子伴侣的双重身份。7发现人类子宫平滑肌2-DE图谱存在多个分子量相等，等电点不同的HSP27蛋白斑点，提示人类妊娠晚期子宫平滑肌组织存在HSP27的翻译后修饰作用，HSP27可能通过翻译后修饰作用参与人类晚期妊娠的维持和分娩发动。第二章HSP27在临产前后子宫体部平滑肌的差异表达及其与分娩发动的关系目的：为了确保蛋白质组学技术筛选的差异蛋白为真正的差异蛋白质，我们对第一章PMF质谱鉴定的差异蛋白HSP27进行了不同表达水平的验证。方法：收集临产前后子宫体部平滑肌，分别采用半定量RT-PCR方法和免疫印迹、免疫组化技术对HSP27表达进行比较。结果：半定量的RT-PCR：足月未临产子宫体部和足月自然临产子宫体部平滑肌组织HSP27 mRNA的相对表达量依次为0.4801±0.0453和0.8320±0.0981，两组比较差异有显著性(P＜0.001)，结果与蛋白质组学一致。免疫印迹：看家蛋白β-actin在两组中均有表达，而且表达量没有明显差异；HSP27蛋白在临产前后子宫体部平滑肌组织表达量有显著变化，HSP27在临产后表达明显上调，且两组中蛋白条带均为2条。结果与蛋白质组学一致。半定量免疫组化：HSP27阳性表达定位于细胞浆。足月未临产子宫体部和自然临产子宫体部平滑肌细胞胞浆中均有HSP27的表达，但在未临产子宫体部平滑肌，HSP27阳性染色面积较少，仅部分胞浆面积着色；而临产后子宫体部平滑肌阳性染色面积较多，胞浆广泛着棕黄色。用MIAS生物医学图象分析管理系统测定两组HSP27阳性产物表达的平均光密度值，依次为0.2290±0.0419和0.6360±0.1083，两组间比较，差异具有显著性(P＜0.001)，研究结果与蛋白质组学结果一致。结论：通过蛋白质组学、免疫印迹法、免疫组化和半定量RT-PCR多种方法交互印证，从mRNA水平和蛋白水平均证实了临产前后子宫体部HSP27表达具有显著性差异。同时我们发现临产前后子宫体部平滑肌组织中存在HSP27的翻译后修饰作用，提示HSP27可能通过翻译后修饰作用参与晚期妊娠的维持和分娩发动。HSP27在临产后表达上调，提示其可能在分娩发动中兼有收缩调节蛋白和分子伴侣的双重身份。第三章Transgelin在临产前后子宫体部平滑肌的差异表达及其与分娩发动的关系目的：为了确保蛋白质组学技术筛选的差异蛋白为真正的差异蛋白质，我们对第一章PMF质谱鉴定的差异蛋白Transgelin进行了不同表达水平的验证。方法：收集临产前后子宫体部平滑肌，分别采用半定量RT-PCR方法和免疫印迹、半定量的免疫组化技术和对Transgelin表达进行比较。结果：半定量的RT-PCR：足月未临产子宫体部、足月自然临产子宫体部平滑肌组织TAGLN mRNA的相对表达量依次为0.3526±0.0572、0.9170±0.1483，两组比较差异有显著性(P＜0.05)。免疫印迹：看家蛋白β-actin在两组中均有表达，而且表达量没有明显差异；而Transgelin蛋白在临产前后子宫体部平滑肌组织表达量有显著变化，临产后Transgelin表达上调，结果与蛋白质组学研究的结果一致。半定量免疫组化：Transgelin阳性表达定位于细胞浆。两组中均有Transgelin的表达，但在未临产子宫体部平滑肌，Transgelin阳性染色面积相对较少，仅部分胞浆面积着色；而临产后子宫体部平滑肌阳性染色面积较多，胞浆广泛着棕黄色。用MIAS生物医学图象分析管理系统测定足月未临产和足月临产子宫体部Transgelin阳性产物表达的平均光密度值，分别为0.1300±0.0100和0.3069±0.0968，两组间进行比较，差异具有显著性(P＜0.05)。结论：通过蛋白质组学、免疫印迹法、免疫组化和半定量RT-PCR多种方法交互印证，从mRNA水平和蛋白水平均证实了临产前后子宫体部Transgelin表达具有显著性差异，提示Transgelin可能通过信号传导通路来调节子宫平滑肌细胞的收缩和产力扩布，参与分娩发动。小结：本研究首次在建立人足月子宫平滑肌蛋白质双向电泳图谱的基础上，采用质谱分析结合数据库搜索共鉴定出随机选择的临产前后子宫平滑肌24个差异表达蛋白质，这些蛋白质按功能主要可以分为六类，即细胞结构相关蛋白质、钙结合蛋白质、分子伴侣、抗氧化酶、能量和代谢相关酶类，以及信号传导相关蛋白质。其中一些蛋白质是已知的分娩发动相关蛋白如Actin、S100A9，一些蛋白质如Transgelin、HSP27是尚未见报道的人子宫体部分娩发动相关的蛋白质，还有一些蛋白质与分娩发动的关系仍然需要进一步研究。通过运用多种方法对临产前后子宫体部平滑肌Transgelin、HSP27的表达进行交互印证，从mRNA水平和蛋白水平均证实其结果与蛋白质组学结果一致，说明我们的蛋白质组学研究资料可靠，结果可信。本研究为揭示人类子宫平滑肌分娩动因机制提供了科学依据，为临床有效的预测和治疗早产、提高新生儿的出生素质，改善妊娠结局，研发新型宫缩抑制剂的候选靶标提供了新线索。