【摘 要】
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研究背景: 长期以来,人们认为输卵管的主要作用仅为拾取卵子和输送受精卵。近年来,随着生殖医学的发展,人们意识到输卵管不仅起一通道作用,它在配子的成熟、受精和早期胚胎的发
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研究背景:
长期以来,人们认为输卵管的主要作用仅为拾取卵子和输送受精卵。近年来,随着生殖医学的发展,人们意识到输卵管不仅起一通道作用,它在配子的成熟、受精和早期胚胎的发育等方面也起着重要作用。Wnt信号通路是目前信号通路中研究的热点,并且已经发现其在胚胎种植和子宫内膜容受性方面有重要意义。子宫与输卵管均来源于苗勒氏管,且均受到卵巢雌、孕激素的调节而呈现周期性的变化;多种对胚胎种植和子宫内膜容受性起重要作用的细胞因子在输卵管上也呈现表达。然而,目前尚未见输卵管组织中Wnt信号通路以及两者相互关系的研究报道。
目的:
通过实时定量PCR和蛋白印迹方法了解Wnt基因及其抑制因子在人输卵管组织中有无表达,并观察其在月经周期中的表达变化;通过观察米非司酮对人输卵管Wnt基因及其抑制因子表达的影响作用,来初步探讨孕激素对Wnt基因及其抑制因子的调控作用。
方法:
1.选取增生期及分泌期育龄妇女的正常输卵管组织各6例。应用实时定量PCR方法,检测输卵管组织中Wnt-3、Wnt-5a、Wnt-7a、FrpHE和DKK1的基因表达,及在月经周期中的表达变化。并应用蛋白印迹方法检测FrpHE和DKK1的蛋白表达,通过图像分析软件分析蛋白表达结果。
2.选取于月经分泌期服用米非司酮50mg后24小时的输卵管组织(米非司酮组),及未服用米非司酮的分泌期输卵管组织(对照组)各6例。比较米非司酮组与对照组的Wnt-3、Wnt-5a、Wnt-7a、FrpHE和DKK1的基因表达差异,以及FrpHE和DKK1的蛋白表达变化。
结果:
1.Wnt-3、Wnt-5a、Wnt-7a、FrpHE和DKK1在正常育龄妇女的增生期和分泌期输卵管组织中均有表达。增生期Wnt-3和FrpHE的mRNA表达要显著高于分泌期(p<0.05),而分泌期DKK1的mRNA表达则显著高于增生期(p<0.05)。其它基因的表达无显著性差异。分析FrpHE和DKK1的蛋白表达,发现其与mRNA表达相符。
2.米非司酮组输卵管组织的DKK1的mRNA和蛋白表达均较对照组明显降低(p<0.05),而其余各基因的表达在两组间无显著性差异。
结论:
1.在正常育龄妇女的输卵管组织中存在Wnt部分家族成员Wnt-3、Wn-5a、Wnt-7a及其抑制因子FrpHE和DKK1的表达。
2.Wnt-3、FrpHE和DKK1的表达在月经周期中的不同时期发生了相应改变,提示Wnt信号通路可能受到卵巢性激素的调节作用。
3.孕激素受体拮抗剂米非司酮能显著降低分泌期输卵管上DKK1的表达,初步证明了孕激素是DKK1表达的重要调控因子;推测DKK1可能通过孕激素的调控而改变输卵管的功能状态,从而可能对受精卵的运输、胚胎的着床和发育产生影响。
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