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研究目的:探索上皮剪切调控蛋白1(ESRP1)的表达与非小细胞肺癌(NSCLS)上皮间质转化(EMT)的关系及机制研究。研究方法:1.收集2015-2019年在宁夏医科大学大学总医院经病理确诊的非小细胞肺癌患者石蜡包埋的手术标本和新鲜组织标本共65例作为肺癌组,选取肿瘤病灶边缘5cm以上肺组织的石蜡包埋手术标本和新鲜组织标本共25例作为癌旁组,选取经病理确诊为肺原位癌和不典型增生患者的石蜡包埋标本和新鲜肺组织标本共20例作为癌前病变组,以及经病理确诊为肺癌转移性胸水沉渣的石蜡包埋标本及新鲜胸水沉渣标本共17例作为肺转移癌组,同时选取同期入院行肺叶或肺段切除的经病理确诊为肺良性病变的石蜡包埋手术标本和新鲜组织标本30例作为对照组,采用免疫组织化学及免疫印迹的方法分别检测对照组,癌前病变组,肺癌组,癌旁组及肺转移癌组中肺组织标本ESRP1,相关转录因子Snail,Twist以及EMT相关标志物(E-Ca,N-Ca,Vimentin,a-SMA)的表达情况,分析ESRP1蛋白的表达与非小细胞肺癌临床参数:年龄,性别,吸烟史,肿瘤分期、分化程度及淋巴结转移的相关性,以及ESRP1蛋白的表达与患者预后生存的关系。2.体外培养人肺腺癌细胞系(A549),用转化生长因子β1(TGFβ1)在不同浓度点及不同时间点作用细胞,采用免疫印迹的方法检测ESRP1,相关转录因子Snail,Twist以及EMT相关标志物(E-Ca,N-Ca)的表达情况。研究结果:一、非小细胞肺癌癌前病变、肺癌、癌旁、肺转移癌各组ESRP1及EMT相关转录因子、EMT相关标志蛋白表达的研究1、在非小细胞肺癌癌前病变、肺癌、癌旁、肺转移癌各组,EMT相关标志蛋白(E-Ca,N-Ca,Vimentin,a-SMA)表达情况对比研究:(1)非小细胞肺癌组、癌前病变组与对照组EMT相关标志蛋白的表达情况:免疫组织化学染色及免疫印迹结果示:癌前病变组及非小细胞肺癌组EMT中间质表型的标志物α-SMA、N-Ca表达高于对照组,而上皮表型的标志物E-Ca表达低于对照组,差别均具有统计学意义(P<0.05)。而癌前病变组与非小细胞肺癌组EMT相关标志物:α-SMA、N-Ca的表达差别无统计学意义(P>0.05);(2)非小细胞肺癌组、癌旁组及肺转移癌组EMT相关蛋白的表达情况:免疫组织化学染色及免疫印迹结果示:肺癌组及肺转移癌组EMT中间质表型的标志物α-SMA、N-Ca表达高于癌旁组,且差别均具有统计学意义(P<0.05)。而肺癌组与肺转移癌组EMT相关标志物:α-SMA、N-Ca的表达差别无统计学意义(P>0.05)。2、在非小细胞肺癌癌前病变、肺癌、癌旁、肺转移癌各组,ESRP1及相关转录因子Snail,Twist的表达情况对比研究:(1)非小细胞肺癌组、癌前病变组与对照组ESRP1及相关转录因子Snail,Twist的表达情况:免疫组织化学染色及免疫印迹结果示:癌前病变组及非小细胞肺癌组ESRP1及EMT相关转录因子Snail,Twist的表达均高于对照组,且差别均具有统计学意义(P<0.05)。(2)非小细胞肺癌组、癌旁组及肺转移癌组ESRP1及相关转录因子Snail,Twist的表达情况:免疫组织化学染色及免疫印迹结果示:肺癌组ESRP1表达高于癌旁组及转移癌组,且差别均具有统计学意义(P<0.05),而癌旁组及肺转移癌组ESRP1的表达差别无统计学意义(P>0.05);肺癌组及肺转移癌组Snail,Twist的表达均高于癌旁组,且差异具有统计学意义(P<0.05),而肺癌组及肺转移癌组Snail,Twist的表达差别无统计学意义(P>0.05)。3、非小细胞肺癌组肺组织ESRP1表达情况与肺癌患者临床参数的分析:在非小细胞肺癌组织中,ESRP1的表达与吸烟史(P<0.05),肿瘤分化程度(P<0.05),肿瘤分期(P<0.05),远处转移(P<0.05)密切相关,并且Kaplan-Meier曲线显示高ESRP1表达的患者总体生存率明显优于ESRP1低表达或阴性的患者(P<0.05),COX生存分析显示ESRP1是影响非小细胞肺癌患者预后的独立危险因素。二、TGF作用人肺腺癌细胞系A549细胞EMT及EMT相关转录因子表达的研究1、TGFβ1诱导A549细胞EMT及EMT相关标志物表达情况:TGFβ1不同浓度点和时间点刺激A549细胞,免疫印迹检测EMT相关标志蛋白:N-Ca蛋白的表达水平高于对照组(P<0.05),E-Ca蛋白的表达水平低于对照组(P<0.05)。2、TGFβ1作用A549细胞ESRP1、EMT相关转录因子Snail,Twist的表达情况:TGFβ1不同浓度点和时间点刺激A549细胞,免疫印迹检测ESRP1表达的蛋白水平低于对照组(P<0.05),Snail,Twist的表达的蛋白水平高于对照组(P<0.05)。研究结论1、非小细胞肺癌的发生,发展过程中均存在不同程度的上皮间质表型转化(EMT):在肺癌癌前病变、癌组织以及肺转移癌均存在以上皮表型(E表型)向间质表型(M表型)的转化。2、非小细胞肺癌的发生、发展过程中存在不同程度的ESRP1及相关转录因子Snail,Twist的表达:即在肺癌癌前病变、癌组织ESRP1及相关转录因子Snail,Twist均高表达,在肺转移癌和癌旁ESRP1表达下降,而相关转录因子Snail,Twist在肺转移癌中表达上调;且ESRP1的表达与肿瘤分化程度和TNM分期密切相关,提示:ESRP1及相关转录因子Snail,Twist可能通过某种信号途径参与肺癌的发生、发展。3、ESRP1的阳性表达与非小细胞肺癌患者预后密切相关,可能是一个良好的预后标志物。4、TGFβ1上调EMT转录因子Snail,Twist表达的同时抑制EMT调控因子ESRP1的表达,从而诱导人肺腺癌细胞出现EMT。提示TGFβ1-Snail/Twist-ESRP1-EMT信号通路在人肺腺癌细胞EMT的发生、发展中发挥重要作用。