RMP对肿瘤细胞放射敏感性的影响及其机制的初步研究

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目的:研究不同肿瘤细胞辐照敏感性的差异以及RMP对肿瘤细胞放射敏感性的影响,并对其中具体机制进行初步探讨。方法:1.CCK-8检测经不同剂量的60Coγ射线辐照处理后,不同种类的肿瘤细胞的增殖情况,筛选出辐照敏感细胞株与辐照耐受株,同时确定后续实验中CCK-8实验的辐照剂量。2.克隆形成实验检测CNE-1、HEp-2及HepG2经不同剂量的60Coγ射线辐照后克隆形成的情况。3.彗星电泳检测不同辐照敏感性的细胞株经60Coγ射线辐照处理后DNA损伤修复情况。4.流式细胞术检测不同辐照敏感性的细胞株经60Coγ射线辐照处理24 h、72 h后细胞凋亡情况。5.Western Blot检测不同辐照敏感性的细胞株辐照前后p-ATM、p65等损伤修复相关蛋白的表达。6.CCK-8检测不同敏感性的细胞株瞬时转染2μg RMP过表达质粒,经60Coγ射线辐照处理后细胞的增殖情况。7.流式细胞术检测MCF-7细胞瞬时转染2μg RMP经60Coγ射线辐照处理后细胞凋亡情况。8.通过裸鼠皮下移植瘤实验,检测辐照前后RMP对移植瘤生长的影响。9.HE染色检测移植瘤的生长状况。结果:1.CCK-8结果显示人鼻咽癌细胞株CNE-1及人喉癌细胞株HEp-2细胞株在10Gy辐照时增殖能力就明显受到抑制,在20 Gy、50 Gy时增殖能力抑制情况更为严重;而在肝癌细胞株HepG2、Hep3B及乳腺癌细胞株MCF-7中,辐照对细胞增殖的抑制作用并不明显;在肝癌细胞株Huh7及人肺癌细胞株A549中,辐照对细胞增殖的影响介于两者之间。2.在辐照剂量为2 Gy、4 Gy及6 Gy时,辐照耐受细胞株HepG2与两株辐照敏感细胞株CNE-1、HEp-2相比显著增高,有显著性差异(P<0.005)。3.彗星电泳结果显示在CNE-1、HEp-2和MDA-MB-231三株细胞中,辐照后彗星电泳彗尾的OTM值较未辐照组明显增加;而在HepG2、Hep3B及MCF-7三株细胞中彗星电泳彗尾的OTM值较未辐照组增加得并不明显。4.在辐照24 h后,辐照敏感株和辐照耐受株细胞的凋亡率较未辐照组无明显差异。在辐照72 h后,辐照敏感的鼻咽癌细胞株CNE-1及人喉癌细胞株HEp-2的凋亡率较未辐照组明显增高;而辐照耐受的细胞株凋亡率则相对较低。5.Western Blot结果显示,不同辐照敏感性的细胞受到辐照后都可以促进ATM磷酸化及p65磷酸化。6.在辐照敏感株CNE-1和HEp-2中,与对照组相比,过表达RMP可以显著增加其对辐照的耐受性(P<0.001);在辐照耐受株HepG2、MCF-7中,过表达RMP也可以增加其对辐照的耐受性,但无显著性差异。7.MCF-7中瞬时转染NC、RMPo及RMPi经辐照处理,与未辐照组相比NC组与RMPo组辐照前后凋亡率差异不明显,RMPi组辐照后凋亡率明显提高。8.裸鼠皮下移植瘤实验结果显示RMP过表达组移植瘤体积显著大于对照组,RMP干扰组移植瘤体积显著小于对照组。9.HE染色结果显示辐照后RMPo组肿瘤细胞明显增多,生长状况较对照组好;RMPi组肿瘤细胞密度较对照组明显降低,细胞生长情况较差。结论:1.筛选出CNE-1、HEp-2、MDA-MB-231三株细胞为辐照敏感细胞株,HepG2、Hep3B及MCF-7三株细胞为辐照耐受细胞株。2.不同辐照敏感性的肿瘤细胞中,辐照都可以激活的NFκB途径。3.RMP可以增加肿瘤细胞对辐照的耐受性,相反干扰RMP后增加肿瘤细胞的放射敏感性。4.RMP过表达可以促进移植瘤生长,增加移植瘤对辐照的耐受性。
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